致密细颗粒型（AC—2）
【荧光核型特征】
1.分裂间期细胞·细胞核大小、明暗不同，分布不均匀颗粒样染色（图3—3—1）。
2.有丝分裂期细胞·染色体有明显颗粒感，且部分粗颗粒较突出（图3—3—1）。
图3—3—1 不同品牌试剂HEp—2 IFA致密细颗粒型（AC—2）核型特点
A.欧蒙（20倍镜）；B.欧蒙（40倍镜）；C.INOVA（20倍镜）；D.INOVA（40倍镜）；E.AESKU（20倍镜）；F.AESKU（40倍镜）；G.MBL（20倍镜）；H.MBL（40倍镜）；I.康润科技（20倍镜）；J.康润科技（40倍镜）
【核型鉴别】
1.均质型（AC—1）·见本章第二节均质型核型鉴别1。
2.均质型（AC—1）+细颗粒型（AC—4）混合核型·AC—1混合AC—4时，间期细胞有颗粒感但染色均匀，无AC—2样松紧明暗感；分裂中期细胞染色体呈AC—1样均匀染色，染色体外核浆阳性（AC—4引起），而AC—2仅染色体阳性，外圈核浆阴性。
【相关靶抗原】
DFS70/LEDGFp75
1.生物学功能·致密细颗粒70蛋白（dense fine speckles 70，DFS70）因其在间期细胞核浆，以及分裂期细胞染色体呈致密细颗粒样分布且分子量约70 kDa而得名，又被称为晶状体上皮来源生长因子p75（lens epithelium-derived growth factor p75，LEDGFp75）或PC4和SFRS1相互作用蛋白1（PC4 and SFRS1 interacting protein 1，PSIP1）。
DFS70/LEDGFp75主要功能为在炎症、自身免疫性疾病和癌症条件下，增强对应激诱导细胞死亡的抵抗力。DFS70/LEDGFp75是一种多功能蛋白，其C端347～429氨基酸残基（amino acid，AA）为整合酶结合域（integrase binding domain，IBD），可与人类免疫缺陷病毒1整合酶（HIV—1 integrase）相互作用，有助于HIV—1病毒进入细胞核，促进其整合到转录活性位点。其N端部分包含染色体结合元素，如脯氨酸—色氨酸—色氨酸—脯氨酸（proline-tryptophan-tryptophan-proline）域、带电区域（charged regions）、AT—hook motif和核定位信号（nuclear localization signal）等，可促进DFS70/LEDGFp75与染色体中的活跃转录位点结合，并与RNA聚合酶Ⅱ（RNA polymerase Ⅱ，RNAPⅡ）转录复合物相互作用，调节应激基因表达。
2.临床意义·抗DFS70抗体与其他抗核抗体不同，该抗体单阳性（即不合并其他自身抗体阳性）有助于临床排除抗核抗体相关自身免疫病（ANA-associated rheumatic diseases，AARD）的诊断。抗DFS70抗体阳性可见于下面几种情况。
（1）正常人群：正常人群中阳性率约0～21.6％［1］，体检人群中HEp—2 IFA抗DFS70抗体所对应的致密细颗粒型（AC—2）占ANA阳性样本的23.8％～53.8％。
（2）不同炎症性疾病：包括眼部疾病［白内障伴特应性皮炎（100.0％），非典型性视网膜变性（100.0％），Vogt-Koyanagi-Harada综合征（66.7％）］、桥本甲状腺炎（6％）、慢性疲劳综合征（3.3％）、幼年特发性关节炎（2.5％）、脱发症（19.8％）、哮喘（4％～16％）、特应性皮炎（0～71％）等［1］。
（3）肿瘤：多见于前列腺癌患者（17.2％～22.3％），也可见于少数乳腺癌或肠癌患者。
（4）系统性自身免疫病：SARD中抗DFS70抗体总检出率约2.8％，而抗DFS70抗体单阳性检出率仅0.5％［1］。值得注意的是，抗DFS70抗体在未分化结缔组织病（undifferentiated connective tissue disease，UCTD）中检出率较高，约8％～40％，且抗DFS70抗体单阳性检出率约50％［2］。有报道指出抗DFS70抗体有助于延缓UCTD进展为SARD，但这一观点尚需进一步论证。
3.检测方法·临床实验室一般以HEp—2 IFA进行初筛，ANA阳性且核型为AC—2需进一步确认抗DFS70抗体，以排除其他自身抗体如抗甲基CpG结合蛋白2（methyl CpG binding protein 2，MeCP2）抗体。一种特定的IFA试剂盒可用于检测DFS70靶抗原，该方法将敲除DFS70基因的HEp—2 细胞（HEp—2 ELITE/DFS70 knockout）和正常HEp—2 细胞混合作为底物（混合比例为9∶1），可同时判读AC—2核型并确认DFS70靶抗原（图3—3—2）。IFA对读片人员要求较高，经验丰富的读片人员，其判读AC—2样本中抗DFS70抗体检出率（ELISA检测）可达95％。但一般实验室对AC—2核型判读准确率较低：国外报道单一核型判读准确性＜50％，混合核型判读准确性＜10％［3］；我国30个临床实验室AC—2核型判读一致性仅21.3％。目前，基于IFA、斑点免疫印迹法（dot immunoblot，DIB）、LIA、ELISA，以及CLIA检测特异性抗DFS70抗体的试剂盒均为科研试剂（表3—3—1），因此提高实验室人员对AC—2的判读能力尤为重要。
图3—3—2 抗DFS70抗体阳性致密细颗粒型（AC—2）血清在HEp—2 ELITE/DFS70— KO细胞底物上的荧光表现
A.低倍镜，20倍镜；B.高倍镜，40倍镜。该图片采用混合包被正常HEp—2细胞以及DFS70基因敲除HEp—2细胞（DFS70 —KO）为底物（来源于Immco Diagnostics，Trinity Biotech公司）。抗DFS70阳性血清在正常HEp—2细胞表现为致密细颗粒荧光核型，而DFS70—KO细胞荧光染色阴性
表3—3—1 实验室部分抗DFS70抗体检测科研试剂盒*
注：*抗DFS70抗体检测试剂均为科研试剂，目前尚无体外诊断试剂注册证产品