1.3.1　斑马鱼模型

Flk1：绿色荧光蛋白斑马鱼（Flk1：GFP），内皮细胞表达GFP（由清华大学发育生物学实验室提供）。通过显微注射，将10-二十八烷基-3，3，30，30-四甲基-吲哚羰花青素-LDL（DiI-LDL，200 mg·ml-1，美国Biome dical Technologies Inc.）注射到受精后（h.p.f.）后48 h Flk1：GFP胚胎的循环血液中。对照组注射磷酸盐缓冲液（phosphate buffer saline，PBS），注射和成像部位如图1-10所示。麻醉斑马鱼胚胎［短时间暴露于0.02% Tricaine（三卡因）］，用淡水唤醒，然后放入到鱼缸中。通过长时间暴露于0.02%的Tricaine使斑马鱼安乐死。

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图1-10　注射和成像部位图。［引自：Xie X, et al. In vitro and in vivo investigations on the effects of low-density lipoprotein concentration polarization and haemodynamics on atherosclerotic localization in rabbit and zebrafish［J］. J R Soc Interface, 2013, 10（82）: 20121053.］
Figure 1-10　The map of injection and imaging site. ［Adapted from: Xie X, et al. In vitro and in vivo investigations on the effects of low-density lipoprotein concentration polarization and haemodynamics on atherosclerotic localization in rabbit and zebrafish［J］. J R Soc Interface, 2013, 10（82）: 20121053.］

斑马鱼的胚胎用1.5%的低熔点琼脂糖固定，以维持正常的血液循环。使用徕卡LSCM（SP5）筛选直段和分叉血管段中的LDL迁移率。绿色荧光的激发波长为488 nm，红色荧光的激发波长为561 nm。使用10倍物镜记录，每次扫描512像素×512像素的焦平面。