7.1.1　实验动物模型

实验动物采用的是健康的雄性新西兰大白兔（质量约2 kg），实验动物模型需经历两次手术获取，第1次手术为球囊损伤以获得颈动脉狭窄模型，第2次手术为支架置入颈动脉狭窄段相对位置。手术前3天和术后7天新西兰大白兔须随饲料喂服药物防止兔子出现感染或严重血栓死亡，氯吡格雷按7.5mg/kg/d的剂量喂服，阿司匹林按10mg/kg/d的剂量喂服。

（1）兔颈动脉狭窄模型的构建

实验所用球囊用超声彻底清洗干净，置于紫外灯下进行整夜照射，术前30 min用灭菌后的报纸包裹好备用。PLLA 血管内支架传输系统（2.0支架传输系）保存在4 ℃冰箱内，术前30 min取出恢复室温，手术过程中用到的手术器械、医用棉花等物品术前一天用灭菌锅高温高压灭菌并放烘箱烘干后使用。

手术前一天对手术间进行消毒并紫外照射过夜，确保实验环境无菌。实验前对动物进行禁食并称重，按0.25 mL/kg的剂量肌内注射陆眠宁，待兔子四肢肌肉完全松弛后，按2.5 mL/kg的剂量腹腔注射10%水合氯醛。待兔子完全麻醉后，剃毛器剃除颈部兔毛，将兔子仰卧固定在手术台上，医用碘酊对其颈部表皮消毒3 min，75%酒精脱碘，沿兔耳缘静脉注射肝素钠溶液。铺上无菌创巾后，沿颈部正中剪开皮肤和筋膜，组织镊钝性分离肌肉，暴露颈动脉。用无菌棉线阻断近远端血流，结扎区段长约20 mm，在血管远心端距离结扎处约3 mm位置开小口，用干燥棉球吸除流出的血液，球囊导丝沿开口下行插入结扎血管段中，以每5 秒 2个大气压的速度均匀加压10个大气压至球囊完全扩张后，前后往复拖动球囊3～5次损伤内皮结构后缓慢收缩球囊至负压，随后抽离球囊。观察颈动脉是否正常搏动，缝合血管开口并去除结扎线，随后缝合肌肉筋膜和表皮，将动物撤离手术台并对其保温直至完全苏醒，观察动物状态并继续喂服药物7天，药物剂量和喂服方式同术前。

（2）支架植入实验(https://www.daowen.com)

球囊损伤术后5周对兔子行支架植入手术，手术前一天对手术间进行消毒并紫外照射过夜，确保实验环境无菌。实验当天对动物进行禁食并称重，按0.25 mL/kg的剂量肌内注射陆眠宁，待兔子四肢肌肉完全松弛后，按2.5 mL/kg的剂量腹腔注射10%水合氯醛。对兔子做麻醉消毒后，铺上无菌创巾后，以球囊损伤术后留存于血管上的缝合位置为基准，用无菌棉线阻断近远端血流，结扎区段长约25 mm，在血管远心端距离结扎处5 mm位置开小口，避开上次手术开口位置，用干燥棉球吸除流出的血液，支架输送系统沿开口下行插入结扎血管段中，肉眼观察使支架位于相对缝合线头近、中、远三个位置。待支架位置确定后抽离球囊，观察颈动脉是否正常搏动，缝合后将动物撤离手术台并对其保温直至完全苏醒，观察动物状态并继续喂服药物7天，药物剂量和喂服方式同术前。

（3）实验样品处理

球囊损伤术后5周随机取空白对照组2只兔子，9周后取空白对照组剩余4只兔子处死取样做组织切片染色。将样品置于30%蔗糖饱和溶液中，在4 ℃冰箱内放置12 h后，再将样品取出放入50%蔗糖饱和溶液中进行4 ℃脱水12 h。然后进行切片处理，将黏附有OCT包埋块的支承器夹在切片机的夹座上，调节切片厚度至20 μm，转动手柄进行修片；当OCT包埋块上可以看到血管组织后，调整切片厚度至8 μm，转动手柄开始切片，切下的血管组织用软刷展平放置在黏附载玻片上。制作好的切片放在切片盒内于-20 ℃保存。采用科迪仪器设备的KD-2950型半自动冷冻切片机进行切片处理。

未植入支架血管段用4%多聚甲醛固定做冰冻切片，随后做HE 染色和MASSON染色，观察血管重构情况。支架植入段血管用 4%多聚甲醛固定，支架近段血管用于冰冻切片做HE染色和MASSON染色，观察血管壁内膜增厚的情况。