3.4.3　CD133抗体捕获EPCs支架

目前促支架再内皮化修复的研究主要分为两种：体内内皮化和体外内皮化。体内内皮化是对支架材料的表面进行抗体修饰等，诱导植入后内皮系细胞在材料表面的增殖和分化，行使正常功能形成类似健康血管的内膜层。抗体在循环血液中捕获到EPCs，进而诱导EPCs分化为成熟的内皮细胞并分泌生长因子促进支架上内皮层的快速修复，目前这一研究已经应用到临床实验并获得可喜的治疗效果。(https://www.daowen.com)

我们制备抗CD133抗体涂层支架并进行了体外评价。前期研究中已证明抗CD133抗体涂层有利于EPC的黏附，从新西兰大白兔骨髓中分离出EPCs，利用鼠尾胶原成血管实验证实抗CD133抗体可以有效促进EPCs的血管新生；使用超声雾化喷涂装置制备了涂覆均匀的抗CD133抗体涂层支架，并且涂层在扩张后保持完整稳定；通过体外实验评价抗CD133抗体涂层支架对EPCs的捕获能力，在静态环境中抗CD133抗体涂层支架捕获EPCs的能力显著高于明胶涂层支架和裸支架，在切应力为2.5 dyn/cm2的流动环境中抗CD133抗体涂层支架捕获EPCs的能力显著高于抗CD34抗体涂层支架、明胶涂层支架和裸支架。检验抗CD133抗体涂层支架和VEGF转基因细胞种植支架的内皮化效果和抗再狭窄能力。扫描电镜结果表明，这两类支架均能有效加快内皮化进程。其中抗CD133抗体涂层支架表面内皮层出现于一周内并且可能早于抗CD34抗体涂层支架，而VEGF干扰组支架效果稍弱，4周后仍未出现形态正常的内皮层，说明VEGF对内皮化进程有着重要的作用；12周后的硬组织切片结果显示，抗体涂层支架和细胞种植支架都达到显著的抗再狭窄效果。其中，抗CD133抗体涂层支架的内膜增生和管腔丢失显著低于明胶涂层支架和裸支架，与抗CD34抗体涂层支架相比未有显著性差异。VEGF过表达细胞种植支架的内膜增生和管腔丢失也显著低于VEGF干扰细胞种植支架和裸支架，再狭窄率与抗CD133抗体涂层支架比较相对较低；为了分析支架上内皮层细胞来源，使用扫描电镜观察了0 h样本中可以通过扫描电镜观察到少量种植细胞，但在此时及其后的样本中并未发现移植细胞的荧光表达，因此推测支架上内皮化的细胞几乎完全来源于宿主自体细胞。为了证明VEGF转基因细胞种植支架的安全性，进一步对器官组织进行了冰冻切片，其中并未观察到表达荧光的转基因细胞，HE染色显示细胞与组织形态与正常组织一致。