鸡病的实验室诊断方法有哪些?
鸡病的实验室诊断因病因不同而诊断方法各异,主要方法有以下几种。
(1)细菌性检验
①细菌的形态鉴定。细菌微小,必须借助于光学显微镜才能看到。细菌从形态上可分为球状、杆状和螺旋状3种基本类型。细菌细胞由细胞壁、胞浆膜、细胞质及细胞核等部分构成。有的细菌除具有基本构造外还能形成荚膜、芽孢、鞭毛和菌毛等特殊构造。细菌的形态、大小及染色特性是鉴定细菌的重要标志。细菌染色方法有单染色法(如亚甲蓝染色法)、复染色法(如革兰氏染色法、姬氏染色法)、芽孢染色法、鞭毛染色法、抗酸染色法、负染色法、雷别格尔荚膜染色法、螺旋体染色法等。
②细菌的生化特性鉴定。各种细菌具有各自独立的酶系统,所以在相应的培养基上生长时,产生不同的代谢产物,据此可鉴定各种细菌。细菌的生化反应在种、型的鉴别上具有重要意义。进行生化性状检查,必须用纯培养物进行。生化性状检查的项目很多,应按诊断需要适当选择。常用的生化检测方法有糖类发酵试验、V-P试验、甲基红试验、靛基质形成试验、硫化氢产生试验、硝酸盐还原试验、亚甲蓝还原试验、尿素酶试验、明胶液化试验等。
③动物接种实验。可用采取的病料或分离的病原,人工接种易感动物,根据其致病力、症状、病理变化等特点来帮助诊断,从而判断所分离菌是否为主要的病原菌。
④细菌的药敏试验。对分离出的病原菌进行药物敏感试验,筛选出高度敏感的药物用于防治该菌引起的感染。
(2)病毒学检验
①病毒的形态观察。病毒的形态有圆形、丝状和弹状等,其形态观察常借助于电子显微镜。各种病毒的大小和形态结构是鉴定病毒的初步依据之一。电子显微镜常用技术包括超薄切片、负染技术和真空喷镀术等。
②病毒的分离培养。病毒没有独立的酶系统,不能在无生命的培养基上生长,常用的分离培养方法有实验动物试验、鸡胚接种和组织细胞培养3种。现在细胞培养已成为病毒培养检查的常用手段,鸡胚和实验动物培养法现在较少使用。
(3)血清学检验 血清学检验是建立在抗原与相应抗体发生反应这一原理的基础上,有的反应是不可见状态,可应用补体、溶血及荧光素、酶和同位素标记等指示系统,使其成为可见或可测状态。血清学检验方法具有严格的特异性和较高的敏感性,在传染病的诊断、病原微生物的分类和鉴定以及抗原分析等方面,均具有广泛的应用。用已知的抗体,可以对分离的病原微生物进行鉴定。相反,通过已知的抗原对康复鸡、隐性感染鸡及接种疫苗后的鸡的抗体可以进行定性或定量测定。血清学检验方法主要有:
①直接凝集试验。细菌、红细胞等颗粒性抗原与相应的抗体在电解质参与下,发生反应相互凝集形成团块,这种现象称凝集反应。按试验方法分为试管法、玻片法、玻板法及微量凝集法等。
②间接凝集试验。将可溶性抗原(或抗体)吸附于与免疫无关的小颗粒(载体)的表面,此吸附抗原(或抗体)的载体颗粒与相应的抗体(或抗原)结合,在有电解质存在的适宜条件下发生凝集现象,因此称为间接凝集试验,也称为被动凝集试验。常用的载体有动物红细胞,聚苯乙烯乳胶乃至细胞和活性炭等。吸附抗原后的颗粒称为致敏颗粒。
③血凝与血凝抑制试验。有许多病毒能够凝集某些动物和人的红细胞,而这种血凝作用可被特异性抗体所抑制。借此,可应用标准病毒悬液测定血清中的相应抗体或应用特异性抗体鉴定新分离的病毒。血凝与血凝抑制试验是诊断鸡新城疫的重要手段,按试验方法分为微量血凝试验、微量血凝抑制试验等。
④沉淀试验。可溶性抗原与相应抗体结合,在有电解质存在时可形成肉眼可见的白色沉淀物,这个过程称为沉淀反应。参与沉淀反应的抗原称为沉淀原,抗体称为沉淀素。沉淀反应有液相和固相之分,液相沉淀反应中以环状沉淀反应最常用,固相沉淀反应主要有琼脂扩散试验,琼脂扩散试验与电泳技术相结合,又发展成免疫电泳技术。
⑤红细胞吸附和红细胞吸附抑制试验。又称血球吸附和血球吸附抑制试验。某些病毒如正黏病毒、副黏病毒和痘病毒等,在培养的细胞内增殖后,可使培养的细胞吸附某些动物的红细胞,而且只有感染细胞的表面能吸附红细胞,不感染的细胞不吸附红细胞,因此,可以作为这些病毒增殖的指征。红细胞吸附现象也可被特异抗血清所抑制,故对病毒鉴定,尤其是对某些不产生细胞病变的病毒来说,常是一个较好的快速鉴定方法。
⑥补体结合试验。可溶性抗原,如蛋白质、多糖、类脂质、病毒等,与相应抗体结合后,其抗原抗体复合物可结合补体,但这一反应肉眼无法观察,如再加入溶血系统,即可通过观察是否溶血来判断反应系统是否存在相应抗原抗体,参与补体结合的抗体称为补体结合抗体。
⑦中和试验。病毒与相应的中和抗体结合后,可使病毒丧失感染力。中和反应不仅具有高度的种、型特异性,而且一定量的病毒必须有相应量的中和抗体才能被中和。因此中和试验不仅可用于病毒种类鉴定,还可用于中和抗体的效价滴定。
⑧免疫标记技术。利用某些能够通过某种特殊理化因素而易于检测的物质标记抗体,这些被标记的抗体与相应抗原结合,通过标记物的检测,从而确定抗原的存在部位,即为免疫标记技术。目前广泛应用的标记技术主要有免疫荧光技术、同位素标记技术和免疫酶技术等,前者主要用于抗原定位,后两者不仅可以用于定性、定量,还可用于定位。