鸡传染性法氏囊病的实验室诊断方法有哪些？

鸡传染性法氏囊病常用的实验室诊断方法有病毒分离和鉴定、琼脂扩散试验以及易感雏鸡接种等。

（1）病原学诊断 通过无菌操作采取法氏囊组织，加入无菌磷酸盐缓冲液研磨成乳剂，离心，取上清过滤后接种鸡胚或细胞进行培养。

①鸡胚培养。经绒毛尿囊膜接种9～11日龄无特定抗原鸡胚，0.1mL/枚，鸡胚通常于感染后4～6天死亡。感染鸡胚发育阻滞、水肿和全身出血，脾脏可能出现斑点状坏死灶和出血斑。

②细胞培养。病毒能在鸡胚成纤维细胞、鸡胚法氏囊细胞及鸡胚肾细胞上生长。常用鸡胚成纤维细胞培养病毒，细胞悬液置37℃温箱在1～2h内贴壁，待24～28h长成单层，即可更换维持液，并接种病毒。37℃温箱培养，观察结果，70%左右的细胞出现病变时收集病毒，进行蚀斑计数或电镜观察。法氏囊病毒形成的蚀斑肉眼可见，为直径约0.2mm的均匀圆斑。

③病毒鉴定。常用电子显微镜负性染色法检测，若观察到对称的二十面体病毒粒子，则为阳性。经过纯化的病毒常呈品格状排列。而不经纯化的病毒培养物中，仅能见到散在的病毒粒子。

（2）血清学诊断 因传染性法氏囊病病毒不能凝集动物红细胞，故本病的血清学诊断方法常有有琼脂扩散试验、荧光抗体技术、酶联免疫吸附试验、中和试验等方法。其中琼脂扩散试验操作简便、特异性好，应用十分普遍；酶联免疫吸附试验快速、敏感、特异，已有商品化的酶联免疫吸附试剂盒销售。

（3）回归易感动物试验 选取3周龄健康无特定抗原鸡，10只，每只肛注病料上清液0.2mL，另取5只作为生理盐水对照组，肛注生理盐水0.2mL，单独隔离饲养，每天观察鸡的症状，连续观察5天，最后解剖所有鸡只，观察病理变化。如出现法氏囊特征性病变，即可诊断为传染性法氏囊病。