目的基因功能验证

克隆获得目的基因，经筛选和鉴定构建到表达载体中后，下一步就是要验证所获得的基因是否可以正常表达及行使功能，并对此基因进行功能验证。

一般在研究中对克隆得到的基因进行功能验证的方法有：

（1）运用生物信息学分析，对基因的cDNA 全长序列进行分析，初步预测基因可能具有的功能，比如预测分析基因产物蛋白质的组成、结构、功能域、序列同源性及理化性质等；

（2）在mRNA和蛋白质两个水平上，对基因的时空表达谱进行分析；(https://www.daowen.com)

（3）采用转基因、基因转导等技术对目的基因功能进行验证，在这些验证方法中，一般运用模式生物将会更快地获得验证结果；

（4）对目的基因进行基因敲除或RNAi，减弱或沉默相应基因的表达，从而影响蛋白水平，通过检测细胞活性，判断蛋白质功能；

（5）运用酵母双杂交、BIFC、免疫共沉淀等技术研究与其基因产物相互作用的蛋白，建立基因网络。

模式生物基因组测序的完善及突变体库的建立，为目的基因功能验证提供了便利。很多研究者都是通过模式生物及其突变体，对克隆获得的基因进行验证，并进一步将有益基因用于作物改造，培育新品种和创制新种质。