花粉管通道法的影响因素

供体DNA 片段的大小、DNA 的纯度和浓度、DNA 导入时期等都会影响基因的导入。周光宇认为DNA 片段的大小以不小于107 Da 为宜。过小将有可能得不到带有完整基因的DNA 片段，使DNA 供体的性状无法表达。外源DNA 直接导入技术对DNA 纯度要求极高，一般认为DNA样品光密度值OD260/OD280＞1.8、OD260/OD230＞2，则纯度符合转化要求。不同的植物最适DNA浓度不同。

为了提高当代结实率，在操作时应注意掌握剪去柱头的时期，如果过早，花粉未到达子房，受精作用尚未开始，这时候剪去柱头就破坏了受精，影响结实，得不到种子；过晚则受精作用已经完成，细胞已经形成，花粉管通道已经关闭，外源DNA 不能进入子房。罗明等在2000 年进行的试验中，在颖片完全打开后约1 h，在离颖片基部1/3 处切除并滴加DNA，其结实率约为15%，但在约520粒种子中未检测到转基因植株；而在2001年的试验中，将处理时间提前至颖片完全打开后约半小时，并将切除部位下移至距颖片基部约1/4处，其结实率为3%～4%，但在250多粒种子中获得2 株确认为转基因植株。可见，处理时间及部位对结实率及转化率都有影响。(https://www.daowen.com)

不同的处理时间、不同的外源DNA 浓度对花粉管通道法基因转化有很大的影响，各种植物自授粉到受精经历时间不同，处理时间也不一致。如小麦的有效处理时间是授粉后0.5～3 h，水稻是开花后1～3 h，棉花是授粉后20～28 h，大豆自花授粉后6～32 h，关于玉米的报道较多，方法不同时间也不尽相同，多在自交授粉后16～30 h内。花粉管通道法对温度、湿度也有较高的要求，如温度太高及湿度不足都会严重影响转化结果。DNA 载体缓冲液pH也是比较重要的因素，因受体作物而异，一般在6.5～8.5之间，近中性。