整合外源基因实时荧光定量PCR检测

实时定量PCR 是在PCR 反应体系中加入荧光基团（染料或探针），用荧光信号积累实时监测整个PCR 进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。其特点是：特异性好，实时定量PCR技术通过引物或和探针的特异性杂交对模板进行鉴别，有很高的准确性，阳性低；灵敏度高，用灵敏的荧光检测系统对荧光信号进行实时监控；线性关系好，荧光信号的强弱与模板扩增产物的对数呈线性关系，通过荧光信号的检测对样品初始模板浓度进行定量，误差小；此外使用的材料较少，避免了大量植物组培的工作。此检测结果准确可靠，因此，已成为转基因作物中外源基因整合检测的主要方法。

图4-2　反应的产物扩增曲线

M:荧光阈值：Ct阈值循环数(https://www.daowen.com)

图4-3　用标准曲线定量

李淑洁和张正英（2010）利用SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR 成功检测外源基因在转基因小麦中的拷贝数。王盛、谢芝勋等（2015）用SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR 方法检测转基因烟草中外源绿色荧光蛋白基因（GFP）的拷贝数，在检测的5 株转基因烟草中GFP 基因的拷贝数分别为5、8、19、28 和45，非转基因烟草植株的GFP 基因拷贝数为0。