外源基因的表达检测

根据中心法则，遗传顺序是从DNA 传递到RNA，再传到蛋白质的。已经整合了目的基因的植株基因组，是否将外源基因所携带的遗传信息传递到RNA 水平和蛋白水平？那么就需要对此进行验证，即在转录水平检测到特异mRNA，在翻译水平检测特异蛋白质的生成。

目的基因转录水平的验证方法多用RT-PCR 方法。RT-PCR 方法是检测目的基因在受体植株中转录表达的快速、简单的方法。提取待检植株的RNA，经特定试剂盒条件，mRNA 反转录合成cDNA，利用特异性引物对cDNA 进行体外扩增，根据琼脂糖凝胶电泳结果，以检测目的基因是否在转录水平得到表达。此外还有Northern 杂交，其以DNA 或RNA 为探针，检测RNA 链。但是其基于凝胶电泳的终点定性及反应终点浓度的定量均不能做到准确无误，而且无法检测核酸序列初始量。而荧光定量PCR（相对定量方法）具有快速和准确分析出植物在不同处理条件下该基因表达量差异的特点。其不仅操作简单，而且具有高效的敏感性、特异性，能在同一个反应体系中对多个基因样本进行实时定性及定量测定，从而避免扩增后的复杂操作，减少无谓的交叉污染，提高了定量的准确性。总之，这是检测目的基因是否发挥功能作用的第一步。(https://www.daowen.com)

外源基因表达蛋白的检测：外源基因编码蛋白在转基因植物中能够正常表达并表现出应有的功能，是植物基因转化的最终目的。表达蛋白应具有一定的稳定性，不被细胞内的蛋白酶迅速降解，同时应对植物细胞无毒性。外源基因表达蛋白检测主要利用免疫学原理，ELISA 检测及Western 杂交是经典的方法。