外源基因表达的RT-PCR检测

RT-PCR 是通过反转录和PCR 的方法，鉴定外源基因是否转录及在不同组织部位表达丰度的重要方法。该技术是利用植物总RNA 反转录得到cDNA，以cDNA 为模板，以外源基因特异性引物进行PCR 扩增。根据用于RT 的已知RNA 量、已知cDNA 量、在琼脂糖凝胶上可显带的PCR 循环数能估算出所研究基因的表达程度。RT-PCR 比Northern 杂交更灵敏，特别是在外源基因以单拷贝方式整合时，其mRNA 的检出常用RT-PCR。(https://www.daowen.com)

由于RT-PCR 是在总RNA 或mRNA 水平上操作，检测过程中必须注意RNA 的降解和DNA 的污染，另外还要设置严格的对照来防止假性结果的出现。