原生质体转化法

原生质体转化法是以原生质体为受体的转基因方法的总称。该方法包含两个重要的部分：原生质体的分离与再生和外源DNA 转化。根据外源DNA 转化方法的不同可分为PEG介导转化法、电击法、脂质体介导转化法、显微注射法和农杆菌介导法等原生质体转化法。

原生质体的分离是原生质体转化法的核心步骤。历史上原生质体的分离经历了以下三个重要阶段：

（1）1892年，Klercker采用机械法进行了植物原生质体的分离。

（2）1960 年，Cocking 使用疣孢漆斑菌（Myrothecium verrucaria）培养物制备的高浓度的纤维素酶溶液降解细胞壁，获得大量有活力的裸细胞（原生质体）。

（3）1968年，Takebe首次使用商品酶（离析酶和纤维素酶）消化掉了烟草叶肉细胞细胞壁，释放出原生质体。自此，植物原生质体变成了一个热门的研究领域。(https://www.daowen.com)

原生质体作为转化受体具有以下优点：

（1）无细胞壁的原生质体的细胞全能性较普通细胞更好。

（2）原生质体是单细胞系统，没有或较少受周围细胞和微环境的影响。

（3）原生质体再生的植株也是由单细胞发育而来，性状易纯化且遗传稳定。所以向原生质体导入外源基因比向其他外植体导入外源基因有更大的优势，成为遗传转化中一种良好的受体。由于基因枪技术的不断发展，向植物体直接导入外源基因已不再像以前那么困难，所以原生质体转化法的应用日趋减少，但在特定条件下，如转移细胞器及DNA 大片段时仍有一定的应用价值。