整合外源基因的原位杂交

四、整合外源基因的原位杂交

原位杂交技术是20 世纪60 年代建立起来的一种可以将特定基因或序列直接定位到染色体上的技术,它是细胞遗传学技术与分子生物学技术相结合的产物。

鉴定转基因植物时,当DNA分子大于250 kb,其限制性酶切图谱很难确切得到,这时可采用染色体DNA 原位杂交来了解外源基因在植物染色体上的整合位置,即以标记的外源基因为探针,在适宜的条件下,探针与固定在玻片上的细胞内变性染色体上互补序列形成稳定的杂交体,然后根据探针的标记性质进行检测。放射性同位素标记的探针,通过放射自显影检测;酶标探针通过显色反应检出,在显微镜下观察。(https://www.daowen.com)

王玉海(2016)利用基因组原位杂交(genomic in situ hybridization,GISH)、多色原位杂交(multicolor genomic in situ hybridization,mc-GISH)、多色荧光原位杂交(multicolor fluorescence in situ hybridization,mc-FISH)及分子标记技术,分析并明确了小麦-山羊草渐渗系TA002 的染色体组成特点。