耐胆盐革兰阴性菌方法适用性预试验
5.1 常规方法。
5.1.1 试验组。取如意珍宝丸10 g加到灭菌的三角瓶中，加入100 mL胰酪大豆胨液体培养基，制成供试液（1∶10），在20～25℃培养2 h（不增殖），分别取培养物10 mL，分别加到100 mL肠道菌增菌液体培养基中，一瓶加大肠埃希菌菌悬液1 mL（菌数不大于100 cfu），另一瓶加入铜绿假单胞菌菌悬液1 mL（菌数不大于100 cfu），均置于30～35℃24～48 h，取每一瓶培养物接种于紫红胆盐葡萄糖琼脂培养基上，30～35℃18～24 h，培养。
5.1.2 阳性对照组。将大肠埃希菌菌悬液1 mL、铜绿假单胞菌菌悬液1 mL分别加到100 mL胰酪大豆胨液体培养基中，按《中国药典》2015年版四部要求进行检验；同时注皿计大肠埃希菌菌悬液、铜绿假单胞菌菌悬液的菌数。
5.1.3 供试品对照组。取如意珍宝丸1∶10供试液10 mL加到灭菌的三角瓶中，加入100 mL胰酪大豆胨液体培养基，按《中国药典》2015年版四部要求进行检验。
5.1.4 阴性对照组。用同批配制、灭菌的胰酪大豆胨液体培养基，按《中国药典》2015年版四部要求进行检验。
耐胆盐革兰阴性菌方法适用性预试验常规方法结果见表4。
表4 耐胆盐革兰阴性菌方法适用性预试验常规方法
注：1.+表示液体浑浊；-表示液体澄清或平板无菌落生长。
2.大肠埃希菌、铜绿假单胞菌加菌量分别为56 cfu和63 cfu。
结果：采用《中国药典》2015年版四部147页耐胆盐革兰阴性菌常规方法进行试验，未检出大肠埃希菌和铜绿假单胞菌，方法不可行。
5.2 增菌液扩大方法。
5.2.1 试验组。取如意珍宝丸10 g加到灭菌的三角瓶中，加入100 mL胰酪大豆胨液体培养基，制成供试液（1∶10），在20～25℃培养2 h（不增殖），分别取培养物10 mL，分别加到300 mL肠道菌增菌液体培养基中，一瓶加大肠埃希菌菌悬液1 mL（菌数不大于100 cfu），另一瓶加入铜绿假单胞菌菌悬液1 mL（菌数不大于100 cfu），均置于30～35℃24～48 h，取每一瓶培养物接种于紫红胆盐葡萄糖琼脂培养基上，30～35℃18～24 h，培养。
5.2.2 阳性对照组。将大肠埃希菌菌悬液1 mL、铜绿假单胞菌菌悬液1 mL分别加到300 mL胰酪大豆胨液体培养基中，按《中国药典》2015年版四部要求进行检验；同时注皿计大肠埃希菌菌悬液、铜绿假单胞菌菌悬液的菌数。
5.2.3 供试品对照组。取如意珍宝丸1∶10供试液10 mL加到灭菌的三角瓶中，加入300 mL胰酪大豆胨液体培养基，按《中国药典》2015年版四部要求进行检验。
5.2.4 阴性对照组。用同批配制、灭菌的胰酪大豆胨液体培养基，按《中国药典》2015年版四部要求进行检验。
耐胆盐革兰阴性菌方法适用性预试验增菌液扩大方法结果见表5。
表5 耐胆盐革兰阴性菌方法适用性预试验增菌液扩大方法
注：1.+表示液体浑浊；-表示液体澄清或平板无菌落生长。
2.大肠埃希菌、铜绿假单胞菌加菌量分别为49 cfu和68 cfu。
结果：采用《中国药典》2015年版四部147页耐胆盐革兰阴性菌增菌液扩大方法进行试验，可以检出大肠埃希菌和铜绿假单胞菌，方法可行。