方法适用性建立

十、方法适用性建立

10.1 菌悬液制备、菌悬液数量测定同预试验方法。

10.2 需氧菌计数方法适用性试验。

10.2.1 试验组。分别取如意珍宝丸1∶10供试液2 mL加入pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液100 mL,混匀,进行薄膜过滤,用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液冲洗,每膜300 mL,分别加入金黄色葡萄球菌、白色念珠菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌、黑曲霉0.1 mL菌悬液(小于1 000 cfu),制成每毫升如意珍宝丸1∶10供试液,含菌数小于100 cfu,取出滤膜,面朝上贴于胰酪大豆胨琼脂培养基上,培养、计数。

10.2.2 菌液对照组。用菌悬液替代试验样品溶液,进行薄膜过滤,测定阳性对照菌数。

10.2.3 供试品对照组。取如意珍宝丸1∶10供试液2 mL加入pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液100 mL,混匀,进行薄膜过滤,用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液冲洗,每膜300 mL,取出滤膜,面朝上贴于胰酪大豆胨琼脂培养基上,培养、计数。

10.2.4 阴性对照组。用同批配制、灭菌的胰酪大豆胨液体培养基1 mL替代样品,进行阴性对照菌数测定。

10.3 霉菌和酵母菌总数方法适用性试验。

10.3.1 试验组。分别取如意珍宝丸1∶10供试液2 mL加入pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液100 mL,混匀,进行薄膜过滤,用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液冲洗,每膜300 mL,分别加入白色念珠菌、黑曲霉0.1 mL菌悬液(小于1 000 cfu),制成每毫升如意珍宝丸1∶10供试液,含菌数小于100 cfu,取出滤膜,面朝上贴于沙氏葡萄糖琼脂培养基上,培养、计数。

10.3.2 菌液对照组。用菌悬液替代试验样品溶液,进行薄膜过滤,测定阳性对照菌数。

10.3.3 供试品对照组。用供试品替代试验组液体试验。

10.3.4 阴性对照组。同法进行试验。

计数方法适用性试验结果见表11。

表11 计数方法适用性试验

注:-表示平板无菌落生长。

10.4 耐胆盐革兰阴性菌、大肠埃希菌、沙门菌方法适用性,采用预试验方法可以检出试验菌,方法可行。