SARS-CoV-2抗体检查
SARS-CoV-2感染人体后,病毒属于外源性物质会激发人体的免疫系统,从而产生特异性抗体。抗体检查具有廉价、快速等优点,但是不能作为确诊或排除的依据,可作为核酸检测的重要补充,应用于监控病程及流行病学调查等。目前针对SARS-CoV-2的抗体检查,主要检测患者SARS-CoV-2特异性IgM与IgG的含量。感染早期IgM快速增加,在发病后3~5日检测开始呈阳性。随着时间的推移,机体的免疫系统开始大量产生IgG,同时感染早期产生的IgM被病毒中和,造成IgM与IgG之间相对浓度的变化。感染的中后期,人体可稳定产生大量IgG,在传染病学调查中,其可作为接触SARS-CoV-2的依据。现仅介绍胶体金法和荧光免疫层析法等两种常用的抗体检查方法。
(一)胶体金法
1.检测原理。纳米级胶体金颗粒与蛋白质牢固结合,与胶体金结合的蛋白质大量聚集时会呈现红色或紫红色。在胶体金法中SARS-CoV-2抗原与质控抗体预先与胶体金结合,适量样本加入检测孔后,在毛细作用下移动,样本中的抗SARS-CoV-2 IgG/IgM抗体和胶体金标记的SARS-CoV-2抗原结合形成胶体金-抗原-抗体复合物,该免疫复合物沿着硝酸纤维素膜层析至检测区(M),与预包被的单克隆抗人IgM结合,形成紫红色的M线,显示抗SARS-CoV-2 IgM阳性;继续层析到检测区(G)与预包被的抗人IgG结合,形成紫红色的G线,显示抗SARS-CoV-2 IgG阳性。胶体金标记的质控抗体层析至质控区(C),与预包被的质控抗体结合,形成紫红色的C线,显示测试有效;如果质控线未出现,表明检测结果无效。
2.实验操作。
(1)滴加10μL样本(全血、血浆或血清)至测试条检测孔。
(2)滴加2滴样本稀释液至测试条检测孔。
(3)室温放置15分钟内判读结果。
3.结果判定(表5-1)。
表5-1 胶体金法检测SARS-CoV-2抗体的结果判读

4.注意事项。
(1)胶体金法只能用于体外诊断,操作方法不可省略或简化。
(2)胶体金法只能作为定性检测,不能作为分析抗体含量的定量方法。
(3)感染早期,患者体内的抗体含量低于胶体金法的检测限,导致检测结果为阴性。若怀疑患者被感染,应提示患者在10~20天内复查。
(4)当样本发生溶血或储存时间过长,以及患者体内存在嗜异性抗体与类风湿因子的情况下,检测结果可能呈假阳性。
(5)胶体金法的阳性结果不能作为COVID-19的确诊依据,需要结合其他病原学方法做进一步检测,才能确诊或排除。(https://www.daowen.com)
(二)荧光免疫层析法
1.检测原理。荧光免疫层析技术是一种结合荧光免疫技术和色谱层析技术的分析方法。在该技术中固定相为包含检测区(T)与质控区(C)的条状纤维材料,流动相为测试液。适量样本加入检测孔后,样本在毛细作用下移动,样本中的SARS-CoV-2 IgG抗体或IgM抗体和荧光微球标记的SARS-CoV-2抗原结合形成微球-抗原-抗体复合物,该免疫复合物沿着硝酸纤维素膜层析至检测区(T),与预包被的抗人IgG抗体或IgM抗体结合,其荧光强度与样本中的抗SARS-CoV-2 IgG抗体或IgM抗体含量成正比;鸡IgY荧光颗粒复合物作为质控抗体层析至质控区(C),与预包被的羊抗鸡IgY抗体结合。通过测量检测区与质控区的荧光强度,可对样本中的抗体进行定量分析。
2.实验操作。
(1)滴加10μL样本(全血、血浆或血清)于样本缓冲液管中,混合均匀。
(2)将80μL混合后样本加入测试条检测孔。
(3)等待15分钟放入干式荧光免疫定量分析仪中分析。
3.结果判定。
(1)IgM抗体检测结果<1U/L,为阴性;反之,检测结果≥1U/L则为阳性,所得结果为IgM抗体的相对含量。
(2)IgG抗体检测结果<1U/L,为阴性;反之,检测结果≥1U/L则为阳性,所得结果为IgG抗体的相对含量。
4.注意事项。
(1)荧光免疫层析法只能用于体外诊断,操作方法不可省略或简化。
(2)荧光免疫层析法使用仪器为半自动或全自动荧光免疫定量分析仪。
(3)感染早期,患者体内的抗体含量低于荧光免疫层析法的检测限,导致检测结果为阴性。
(4)高滴度的IgM抗体或IgG抗体可导致另一种抗体的检测结果呈阴性,如怀疑患者感染SARS-CoV-2,需要同时对两种抗体进行检测。
(5)当样本发生溶血或储存时间过长,以及患者体内存在嗜异性抗体与类风湿因子的情况下,检测结果可能呈假阳性。
(6)荧光免疫层析法的阳性结果不能作为COVID-19的确诊依据,需要结合其他病原学方法做进一步检测,才能确诊或排除。