紫外光谱鉴别法
一般而言,具有共轭双键的药物具有紫外吸收,可采用紫外光谱法进行鉴别。
(一)常见方法
(1)比较对照品与供试品的紫外光谱的一致性:将供试品与对照品按同法处理制成适当浓度的溶液,在200~400 nm波长范围内扫描两溶液,要求供试品的紫外光谱图应与对照品的紫外光谱图一致。如阿替洛尔的鉴别试验:“本品50g/mL甲醇溶液的紫外光谱图与同样条件下测得的阿替洛尔参考标准品的紫外光谱图一致。”
(2)比较紫外光谱特征(最大吸收波长、最小吸收波长、百分吸收系数)和吸光度比值的一致性。此方法为《中国药典》普遍采用。
应用示例
应用示例一:
《中国药典》维生素B2的鉴别试验:取含量测定项下的溶液,照紫外-可见分光光度法测定,在267 nm、375 nm与444 nm的波长处有最大吸收,在375 nm与267 nm处的吸光度比值应为0.31~0.33;在444 nm与267 nm处的吸光度比值应为0.36~0.39。
应用示例二:
《中国药典》甲氧氯普胺的鉴别试验:取本品,加草酸三氢钾标准缓冲液制成每1 mL中含10g的溶液,照紫外-可见分光光度法测定,在309 nm的波长处有最大吸收,在290 nm的波长处有最小吸收。
(二)注意事项
(1)试验中所用的容量瓶和移液管均应经检定校正、洗净后使用。
(2)使用的石英吸收池必须洁净。当吸收池中装入同一溶剂,在规定波长测定各吸收池的透光率,如透光率相差在0.3%以下者可配对使用,否则必须加以校正。
(3)取吸收池时,手指拿毛玻璃面的两侧。装样品溶液的体积以吸收池体积的4/5为度,使用挥发性溶液时应加盖,透光面要用擦镜纸由上而下擦拭干净,检视应无残留溶剂。为防止溶剂挥发后溶质残留在池子的透光面,可先用蘸有空白溶剂的擦镜纸擦拭,然后再用干擦镜纸拭净。吸收池放入样品室时应注意每次放入方向相同。使用后用溶剂及水冲洗干净,晾干防尘保存,吸收池如污染不易洗净时可用硫酸发烟硝酸[3∶1(V/V)]混合液稍加浸泡后,洗净备用。如用铬酸钾清洁液清洗时,吸收池不宜在清洁液中长时间浸泡,否则清洁液中的铬酸钾结晶会损坏吸收池的光学表面,并应充分用水冲洗,以防铬酸钾吸附于吸收池表面。
(4)测定前应先检查所用的溶剂在测定供试品所用的波长附近是否符合要求,可用1 cm石英吸收池盛溶剂以空气为空白(参比光路中不放置任何物质)测定其吸光度,应符合表3-1规定,并不得在溶剂的截止使用波长以下测定。
表3-1 以空气为空白测定溶剂在不同波长处的吸光度的规定
每次测定时应采用同一厂牌批号、混合均匀的同批溶剂。
(5)称量应按《中国药典》规定要求。配制测定溶液时稀释转移次数应尽可能少,转移稀释时所取容积一般应不少于5 mL。含量测定时供试品应称取2份,如为对照品比较法,对照品一般也应称取2份。吸收系数检查也应称取供试品2份,平行操作,每份结果对平均值的偏差应在±0.5%以内。做鉴别或检查可取样品1份。
(6)供试品溶液的浓度,除各品种项下已有注明者外,供试品溶液的吸光度以在0.3~0.7为宜,吸光度读数在此范围误差较小,并应结合所用仪器吸光度线性范围,配制合适的读数浓度。
(7)用于制剂含量测定时,应注意供试液与对照液的pH值是否一致,如pH值对吸收有影响,则应调至溶液的pH值一致后再测定吸光度。