甾体药物的其他分析方法
（一）鉴别
1.紫外-分光光度法 许多甾体激素分子中存在
共轭体系，在紫外光区有特征吸收。△4--3酮基在240 nm附近（无水乙醇溶液中）有最大吸收；而雌激素的A环苯环在280 nm附近（无水乙醇溶液中）有最大吸收。据此可以对其进行鉴别。《中国药典》用该法进行鉴别的甾体激素药物有炔诺酮片、丙酸倍氯米松等。
（1）炔诺酮片的鉴别：取本品细粉适量，加无水乙醇溶解并稀释制成毎1 mL中约含炔诺酮10
g的溶液，滤过，取续滤液照紫外-可见分光光度法测定，在240 nm的波长处有最大吸收。
（2）丙酸倍氯米松的鉴别：取本品，精密称定，加乙醇溶解并定量稀释制成每1 mL中约含20
g的溶液，照紫外-可见分光光度法测定，在239 nm的波长处有最大吸收，吸光度为0.57～0.60；在239 nm与263 nm的波长处的吸光度比值应为2.25～2.45。
2.薄层色谱法 薄层色谱法具有简便、快速、分离效能高等特点，适用于甾体激素类药物，尤其是甾体激素类药物制剂的鉴别。采用的方法多为对照法，即将供试品溶液和对照品溶液同点于同一薄层板上，按照《中国药典》规定的方法展开、显色、检视，供试品溶液所显主斑点的颜色和位置应与对照品溶液的主斑点相同。《中国药典》中采用该法鉴别的甾体激素类药物有丙酸睾酮注射液、炔诺孕酮炔雌醚片、倍他米松磷酸钠、醋酸甲羟孕酮片、醋酸泼尼松片、醋酸泼尼松眼膏、苯丙酸诺龙注射液、戊酸雌二醇注射液、苯甲酸雌二醇注射液等。
丙酸睾酮注射液的鉴别：取本品适量（约相当于丙酸睾酮10 mg），加无水乙醇10 mL，强力振摇，置冰浴中放置使分层，取上层乙醇溶液置离心管中离心，取上清液作为供试品溶液；另取丙酸睾酮对照品，加无水乙醇制成每1 mL中约含l mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述2种溶液各10
L，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以二氯甲烷-甲醇（19∶0.5）为展开剂，展开，晾干，置紫外光灯（254 nm）下检视。供试品溶液所显主斑点的位置和颜色应与对照品溶液的主斑点相同。
（二）含量测定
甾体激素类药物含量测定的方法有滴定法、高效液相色谱法、紫外-可见分光光度法等方法进行鉴别。除了在氢化可的松的含量测定中介绍的高效液相色谱法、百分吸收系数法和四氮唑比色法外，还有Kober反应比色法、异烟肼比色法等。
1.Kober反应比色法 Kober反应是指雌激素与硫酸-乙醇反应呈色，用水和稀硫酸稀释后重新加热发生颜色变化，并在515 nm波长附近有最大吸收。此反应可用于雌激素类药物的比色法含量测定。
（1）原理：Kober反应由两步组成：①药物与硫酸-乙醇共热产生黄色，在465 nm波长附近有最大吸收。②加水或稀硫酸稀释，重新加热后显桃红色，在515 nm附近有最大吸收。原因是雌激素与酸作用的呈色反应中，在最初是通过去羟基、重排及甲基由C13移到C17而形成产物（a），然后被硫酸氧化形成具有较长共轭双键发色团的产物（c）及进一步生成了具有吸收光谱红移发色团的产物（d）。
（2）方法：用本法测定雌激素的各种制剂时，如果在比色测定前采用分离提取步骤，严格控制反应条件，并扣除背景干扰即可获得满意结果。《中国药典》现在仍采用本法测定复方炔诺孕酮滴丸中炔雌醇的含量，炔诺孕酮不干扰测定。方法如下：
1）供试品溶液的制备：取本品10丸，除去包衣后，置20 mL容量瓶中，加乙醇约12 mL，微温使炔诺孕酮与炔雌醇溶解，放冷，用乙醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。
2）对照品溶液的制备：取炔诺孕酮与炔雌醇对照品，精密称定，加乙腈溶解并定量稀释制成每1 mL中约含炔诺孕酮0.15 mg与炔雌醇15
g的溶液，作为对照品溶液。
3）炔雌醇的含量测定方法：精密量取供试品溶液与对照品溶液各2 mL，分置具塞锥形瓶中，置冰浴中冷却30 s后，各精密加硫酸-乙醇（4∶1）8 mL（速度必须一致），随加随振摇，加完后继续冷却30 s，取出，在室温放置20 min，照紫外-可见分光光度法，在530 nm的波长处分别测定吸光度，计算，即得。
2.异烟肼比色法 甾体激素药物C3位的酮基及其他位置上的酮基能在酸性条件下与羰基试剂异烟肼缩合而形成黄色的异烟腙，在一定波长下具有最大吸收，可用比色法测定甾体激素类药物的含量。《中国药典》现已少用。