三、色谱分析法
色谱分析法是一种分离分析方法，包括纸色谱法、薄层色谱法、柱色谱法、气相色谱法、高效液相色谱法等。色谱法是分析混合物最有力手段，适用于各种组分复杂、测定成分含量低、干扰成分较多的原料药或制剂。在药物含量测定中，以高效液相色谱法和气相色谱法较为常用。
高效液相色谱法（HPLC法）系采用高压输液泵将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有填充剂（固定相）的色谱柱进行分离测定的一种色谱方法。经由进样阀注入的供试品，由流动相带入柱内，各成分在柱内被分离后，依次进入检测器，由记录仪、积分仪或数据处理系统记录色谱信号。本法具有高灵敏度（可达
）、高选择性、高效能、高速度及应用广泛等特点。
定量分析时，可根据供试品或仪器的具体情况采用峰面积法或峰高法，目前大多采用峰面积法。当用于供试品中主成分含量测定时，常采用内标法和外标法，其中外标法最常用。由于微量注射器不易控制进样量，当采用外标法定量时，以定量环或自动进样器进样为宜。
《中国药典》中复方制剂及杂质或辅料干扰因素多的品种，一般多采用高效液相色谱法，品种数量在逐版增加。含量测定项下的内容包括色谱条件和系统适用性试验，并规定所用色谱柱、流动相、检测波长、最低理论板数、分离度和测定法等。
气相色谱法（GC法）系采用气体为流动相（载气）流经装有填充剂的色谱柱进行分离测定的一种色谱方法。注入进样口的供试品被加热汽化，并被载气带入色谱柱进行分离，各组分先后进入检测器，色谱信号用记录仪、积分仪或数据处理系统记录。本法具有速度快、分离效能高、灵敏度高（
或更低）等特点。
当用于供试品中主成分含量测定时，除高效液相色谱法项下规定的内标法和外标法外，亦可采用标准溶液加入法。气相色谱法以手工方式进样时，由于留针时间和室温等因素对进样量的影响，使进样量不易精确控制，故最好采用内标法定量。
药品标准中各品种项下规定的条件除固定相种类、流动相组分、检测器类型不得任意改变外，其余如色谱柱内径、长度、固定相牌号、载体粒度、流动相流速、混合流动相各组分的比例、柱温、进样量、检测器的灵敏度等，均可适当改变，以适应具体品种并达到系统适用性试验的要求。一般色谱图约于20 min内记录完毕。
测定时，先按各品种项下要求对仪器进行适用性试验，即用规定的对照品对仪器进行试验和调整，应达到规定的要求；或规定分析状态下色谱柱的最小理论板数、分离度、重复性和拖尾因子。可根据供试品的具体情况采用峰面积法或峰高法定量。测定杂质含量时，必须采用峰面积法。测定含量时，常用下述两种方法：
1.内标法加校正因子测定供试品中主成分含量 按各品种项下的规定，精密称（量）取对照品和内标物质，分别配成溶液。精密量取各溶液，配成校正因子测定用的药物对照测定溶液。取一定量注入仪器，记录色谱图。测量对照品和内标物质的峰面积，按下式计算校正因子：
式中，AS为内标物质的峰面积，AR为药物对照品的峰面积（或峰高），cS为内标物质的浓度，cR为药物对照品的浓度。
再取各品种项下含有内标物质的供试品溶液，注入仪器，记录色谱图，测量供试品中待测成分和内标物质的峰面积，按下式计算含量：
式中，AX为供试品测定液峰面积，cX为供试品测定液的浓度，f为校正因子，AS和cS分别为内标物质的峰面积和浓度。
当配制校正因子测定用的对照溶液和含有内标物质的供试品溶液使用同一份内标物质溶液时，则配制内标物质溶液不必精密称（量）取。
（1）原料药百分含量计算公式如下：
式中，cX为供试品测定液的浓度；V为固体药物配制成溶液（供试品溶液）体积，mL；n为供试品溶液稀释为供试品测定液的稀释倍数；MS为供试品研细后的取样量，g或mL。
（2）固体制剂（以片剂为例），其标示量百分含量计算公式如下：
式中，cX为供试品测定液的浓度；V为固体药物配制成溶液（供试品溶液）体积，mL；n为供试品溶液稀释为供试品测定液的稀释倍数；MS为供试品研细后的取样量，g。
（3）液体制剂（以注射剂为例），其标示量百分含量计算公式如下：
式中，cX为供试品测定液的浓度；n为供试品测定液的稀释倍数；V样为供试品的取样量，mL。
2.外标法测定供试品中主成分含量 以待测成分的对照品作为对照物质，相同条件下测定供试品测定溶液与对照品测定溶液，得相应峰面积，比较以求得供试品的含量。本法可分为标准曲线法和外标一点法。
（1）标准曲线法：配制一系列已知浓度的标准液，在同一操作条件下，按同量注入色谱仪，测量得各浓度峰面积，作出峰面积与浓度的标准曲线或回归方程。然后在相同的条件下，注入同量供试品测定溶液，测得待测组分的峰面积，根据标准曲线或回归方程，计算出供试品溶液中待测组分的浓度。
（2）外标一点法：按各品种项下的规定，精密称（量）取对照品和供试品，分别配制成对照品测定溶液（cR）和供试品测定溶液（cX），分别精密取一定量，注入仪器，记录色谱图，测量对照品的峰面积（AR）和供试品待测成分的峰面积（AX）（或峰高），按下式计算含量：
式中，AX为供试品测定液峰面积，cX为供试品测定液的浓度，AR和cR分别为供试品测定液中内标物质的峰面积和浓度。
外标法测定固体、液体制剂，其结果计算同内标法，详见式（5-20）、式（5-21）。