（五）菌种制作

1.母种分离

猪肚菇可采用组织分离法获得母种。按常规方法对分离材料表面消毒处理，在菌盖与菌柄的连接处取一小块组织，接种在PDA培养基上，置25℃～28℃条件下培养，然后进行纯化。从组织块上萌发的菌丝，经10～12天长满培养基斜面。菌丝白色，浓密，绒毛状。在有光照的条件下，15天左右在培养基斜面可形成原基，约1个月能发育成米粒大小、带有鳞片的白色子实体直抵棉塞即为母种。

2.母种培养

母种培养基除采用PDA培养基外，还可选用玉米粉200克，麦麸30克，葡萄糖20克，磷酸二氢钾3克，硫酸镁2克，酵母6克，维生素B110毫克，琼脂20克，水1000毫升。还有一个配方为：猪肚菇子实体250克，产地腐殖土100克（浸泡，取滤汁用），蔗糖20克，磷酸二氢钾3克，硫酸镁1.5克，水1000毫升。加热后，在搅拌条件下加入炒熟的大米粉，与上述溶液混匀后，分装到试管内，灭菌后，趁热摆成斜面。此法不用琼脂，尤其适合边远地区生产者使用。

将分离纯化母种按无菌操作接于培养基斜面上培养，培养温度25℃～28℃，10～12天菌丝在培养基斜面长满，即为扩繁母种。

3.原种和栽培种制作

（1）培养基配方 原种和栽培种采用一般木屑培养基均可，常用以下两种。

①阔叶树木屑100千克，麦麸15千克，玉米粉15千克，石灰2千克，蔗糖2.5千克，石膏粉1千克，轻质碳酸钙2千克。

②玉米粒100千克，石灰1千克，麦麸15千克，石膏1千克，轻质碳酸钙1千克，蔗糖1.5千克。将玉米粒放入石灰水中浸泡6～12小时，捞起，用清水淋洗至表面无石灰质，通入蒸汽5～10分钟，使表皮紧缩，熟化，趁热拌入其余辅料。

（2）培养方法 按常规方法装瓶、灭菌，接种后在25℃～28℃条件下培养，原种需30～35天长满瓶，栽培种需25～30天长满瓶或袋。如无杂菌污染，即可用于栽培生产。