（四）菌种制作
1.母种制作
（1）菌种来源 可以采集野生牛舌菌子实体，通过组织分离法获得，也可向科研部门引进母种转管扩接。
（2）培养基配方
①马铃薯（去皮）200克，葡萄糖20克，磷酸二氢钾3克，硫酸镁1.5克，维生素B110毫克，琼脂20克，水1000毫升，pH5.8～6.2。
②马铃薯（去皮）200克，葡萄糖（或蔗糖）20克，玉米粉30克，黄豆粉10克，酵母膏2克，磷酸二氢钾1.5克，硫酸镁0.5克，琼脂20克，水1000毫升，pH自然。
配制按常规装管、灭菌。冷却，排成试管斜面。
（3）转管扩接 牛舌菌无论自己分离获得的母种，或是从其他制种单位引进的母种，均因数量有限，不能满足生产上的需求。因此，一般对分离获得的一代母种，都要进行扩大繁殖，即选择菌丝粗壮、生长旺盛、颜色纯正、无感染杂菌的牛舌菌试管母种，进行转管扩接，以增加母种数量。
每支母种可扩接30～40支子代母种。生产上供应的多为子代母种，它可以进行再次转管扩接，一般每支可扩接20～25支，但转管次数不应过多。因为菌种转管次数太多，菌种长期处于营养生理状态，繁衍受到抑制，势必导致菌丝生命力下降，营养生长期缩短，子实体变小，肉薄，朵小，影响产量和品质。因此母种转管扩接一般以3次为适，最多不得超过5次。
接种后，置26℃左右培养，8～12天菌丝长满斜面即为子代母种。菌丝初为白色或浅黄色，后转浅红色至朱红色，最后变为红褐色。
2.原种和栽培种制作
（1）培养基配方 常用的培养配方为杂木屑75%，麸皮22%，蔗糖1.5%，石膏1.5%，含水量65%。
（2）培养基配制方法 按比例称取木屑或棉籽壳、麦麸、蔗糖、石膏粉。先把蔗糖溶于水，其余干料混合拌匀后，加入糖水反复拌匀。棉籽壳拌妥后，须整理成小堆，待水分渗透原料后，再与其他辅料混合搅拌均匀。检测含水量，一般掌握在60%～65%，灭菌前pH6.5～7.5。
（3）装料 原种多采用750毫克广口玻璃瓶。栽培种可用聚丙烯塑料菌种袋。培养料要求下松上紧，松紧适中。装瓶后也可采取在培养基中间钻一个2厘米深、直径1厘米的洞，可提高灭菌效果，并有利于菌丝加快生长。装瓶后用清水洗净、擦干瓶外部，棉花塞塞口，再用牛皮纸包住瓶颈和棉塞。
（4）灭菌 木屑培养基灭菌以0.152兆帕压力，保持2小时。棉籽壳培养基的，高压灭菌时间应保持在2.5～3小时。棉籽壳含有棉酚，有碍牛舌菌菌丝生长，因此在高压灭菌时，可采取3次间歇式放气法排除有害物质产生的气体，确保菌种的成品率。
（5）接种培养 灭菌冷却至常温，按无菌操作规程接入母种，在25℃～27℃条件下培养，菌丝长满全瓶即为原种，再经扩接1次即为栽培种。