肿瘤的病理学检查方法

第二节　肿瘤的病理学检查方法

一、常规病理检查方法

1.活体组织检查　包括石蜡切片和冰冻切片。

（1）石蜡切片：方法是将标本组织经脱水后包埋于石蜡中，然后切片、染色，显微镜观察并作出诊断。标本的取材方法有以下几种。

1）活检取活体病变组织中的一小块做切片检查，以明确病变的性质及对肿瘤进行分类、分级，指导治疗方案的选择。如用活检钳钳取或手术切取，或用针刺入病灶吸取组织，以及在各种内窥镜检查时取小块组织送检。活检取材应注意：取中病变部位，避免取坏死、出血部位，避免挤压引起人为的变态；取材时应尽量减少创伤、出血；及时固定组织，活检后立即将组织放入足量的10%福尔马林液中固定，以免组织自溶。

2）大体标本送检　无论术前有无病理诊断，手术切出的标本都应送检。术前病理活检因取材局限不易诊断，甚至有误，最后诊断必须根据对大体标本的全面检查而定，避免出现误诊、漏诊。术后大体标本送检包括切出的肿瘤原发灶及其所在器官，清扫出的全部淋巴结，切出器官组织的上下残端或基底部组织等。

大体标本送检的目的是：进一步明确肿瘤性质，进行分级及分类；明确肿瘤的大小、范围、浸润深度及与周围器官组织的关系；了解有无转移；明确手术切出范围是否足够。

（2）冰冻切片：方法是在手术过程中，取一小块新鲜组织，不必固定，送病理科快速冰冻成形，切片染色诊断。一般需要30分钟。

冰冻切片可以用于术前未能明确诊断，术中需要了解病变性质，确定手术方案；术中需明确病变侵犯范围，决定手术切缘时；了解肿瘤外的一些病灶是否属于肿瘤转移。

冰冻切片不能够用来代替石蜡切片做诊断，活检小标本不宜做冰冻切片。

2.细胞学诊断　是取肿瘤组织中的细胞，进行涂片、经染色（巴氏或HE染色）后观察细胞形态，进行诊断的方法。

根据取材方法的不同，可分为脱落细胞学和针刺细胞学。

（1）脱落细胞学：对体表、体腔或与体表相通的管道内肿瘤，取其自然脱落或分泌排出物，或用特殊器具，刮去/擦取/吸取表面的细胞进行涂片的方法，也可去冲洗液离心沉淀涂片。常见的有：痰液、尿液、阴道分泌物等涂片；宫颈刮片、食管拉网涂片、各种内窥镜下刷片；抽取胸水、腹水、心包积液等涂片；支气管冲洗液沉淀涂片等等。

（2）针刺细胞学：用细针（直径小于1mm）刺入肿瘤从体内吸取细胞涂片的方法。对体表可扪及的肿瘤可直接穿刺，包括淋巴结、甲状腺、乳腺、前列腺及肢体的包快穿刺。深部脏器的肿瘤可在影像学协助下穿刺，如B超、CT引导下对腹腔内、纵膈、肺、肝脏甚至脑部肿瘤进行穿刺。

取材后，应将穿刺物立即均匀涂于玻片上，然后湿片即可放入95%酒精中固定至少15分钟。

二、组织化学染色方法和应用(https://www.daowen.com)

通过组织化学染色的方法检测肿瘤细胞浆中某种物质的存在，用于鉴别肿瘤组织来源和类型，如黏液、糖蛋白、黑色素、含铁血黄素等。

应用较多的集中染色技术有：①银纤维染色；②Masson三色；③PAS染色；④黏液染色；⑤脂质染色；⑥黑色素染色。

三、免疫组化染色方法和应用

应用抗原与抗体特异性结合的免疫学原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂　（荧光素、酶、金属离子、同位素）显色来确定组织细胞内抗原（多肽和蛋白质），对其进行定位、定性及定量的研究，从而达到鉴别肿瘤组织来源和亚型分类的目的。

常用的免疫组化染色方法有ABC、LSAB与Envision TM法等。

由于IHC方法简单，可使用的实际种类多，无需昂贵的设备，可用于石蜡切片标本及细胞涂片标本，使用广泛，已成为临床病理诊断必不可少的技术。

四、电镜诊断

在肿瘤病理诊断上，对小部分在常规组织切片检查未能诊断的病例，可以通过电镜检查达到诊断目的。如：①鉴别光镜下难以区分的癌或肉瘤的未分化或低分化肿瘤；②鉴别形态学难以区分组织来源的梭形细胞肿瘤，小圆形细胞肿瘤；③鉴别间皮瘤与腺癌；④鉴别和区分各种神经内分泌肿瘤；⑤确定一些转移性肿瘤的来源；⑥协助淋巴瘤的分类。

但是，由于电镜设备昂贵，切片染色技术要求较高，因此有很大的局限性。

五、肿瘤病理诊断的分子生物学技术

分子肿瘤病理学是一门新兴的学科，它是分子生物学和肿瘤病理学相结合的产物。与传统的肿瘤病理学以形态学为基础的诊断不同，分子肿瘤病理学是从分子水平运用客观的科学证据来作出诊断。分子肿瘤病理学与传统肿瘤病理学不但相辅相成。而且能在传统肿瘤病理学的基础上进一步预测肿瘤的生物学行为及指导治疗。分子肿瘤病理学目前在国外已被广泛地运用于日常的肿瘤病理诊断。它主要包括细胞水平上的临床细胞遗传学和分子水平上的分子肿瘤病理学。

1.临床细胞遗传学　临床细胞遗传学是一门相对古老的科学。因为它是从细胞水平上观察病变，严格来说不属于分子肿瘤病理学的范畴。但由于它的技术和手段与分子肿瘤病理学是相辅相成的。一般也把它列入分子肿瘤病理学的领域。由于肿瘤的发生常伴有染色体的缺失或者异位。而且这种染色体的改变经常是特异性的。病理医生可以利用它来诊断一些利用传统方法无法诊断的肿瘤。临床细胞遗传学又可分为传统的染色体组图分析，荧光原位杂交（FISH），以及较新的比较基因组原位杂交（CGH）等。

2.分子肿瘤病理学　分子肿瘤病理学是分子生物学技术与肿瘤病理诊断相结合的产物。可想而知。它所包含的检查范围很广。并且随着分子生物学技术的更新而在不断的改进中，比如用定量PCR检测与疾病相关的病毒的表达量，或者用反义定量PCR检测血液系统恶性肿瘤的微小残留病等；通过Southernblot或PCR进行克隆性分析，医学教育|网搜集整理或通过检测杂合子缺失（LOH）及等位基因丢失（FAL）来观察肿瘤细胞的印鉴（signature）以及辅助肿瘤的良恶性判断等等。

（张运康　胡　伟）