一、兼并引物PCR
兼并引物PCR是利用蛋白质的氨基酸序列来扩增目的基因。密码子具有兼并性,无法以氨基酸顺序来推测准确的编码DNA序列,但可以被设计成兼并引物来扩增目的DNA序列。
使用兼并引物的注意事项有:①兼并引物是指代表编码单个氨基酸所有不同碱基可能性的不同序列的混合物,设计兼并引物时,寡核苷酸中核苷酸序列可以改变,但核苷酸的数量应相同;②兼并度越低,产物特异性越强,因此,设计兼并引物时应尽量选择简并性小的氨基酸,并避免引物3′末端出现兼并,选择使用的肽链最好避开有4~6个密码子的氨基酸;③兼并的碱基数越多,引物添加量要越大;④次黄嘌呤可以同所有的碱基配对,因而可降低引物的退火温度;⑤设计兼并引物时要参考密码子使用表,注意生物的偏好性。