三、原位PCR

原位PCR技术的基本原理，就是将PCR技术的高效扩增与原位杂交的细胞定位结合起来，从而在组织细胞原位检测单拷贝或低拷贝的特定的DNA或RNA序列。原位PCR结合了具有细胞定位能力的原位杂交和高度特异敏感的PCR技术的优点，既能分辨鉴定带有靶序列的细胞，又能标出靶序列在细胞内的位置，是细胞学科研与临床诊断领域里的一项有较大潜力的新技术，对于在分子和细胞水平上研究疾病的发病机理和临床过程及病理的转归有重大的实用价值，其特异性和敏感性高于一般的PCR。

原位PCR实验的大致过程包括标本的制备、原位扩增及原位检测几个环节。①标本的制备：对于新鲜组织，用石蜡包埋组织，切片；对于培养细胞，可直接制备爬片、甩片或涂片。②原位扩增：多聚甲醛固定组织或细胞，蛋白酶消化处理组织；在组织细胞片上滴加PCR反应液进行扩增，覆盖并加液体石蜡后，在原位PCR仪上进行PCR循环扩增。③原位检测：PCR扩增结束后用标记的探针进行原位杂交，最后用显微镜观察结果。