二、不对称PCR

不对称PCR的基本原理是使两个引物的比例不相等以产生大量的单链DNA（ssDNA），少的引物称为限制性引物，多的引物称为非限制性引物。

不对称PCR两个引物的最佳比例一般为1∶50～1∶100，限制引物的绝对量是关键，限制性引物太多或太少，均不利于单链DNA的生成。一般来说，在不对称PCR反应开始的20～25次循环中，两个比例不对称的扩增引物产生出双链DNA（dsDNA），当限制引物耗光后，随后的5～10次循环产生单链DNA（ssDNA），产生的dsDNA与ssDNA因相对分子质量不同而可以通过电泳分离。

增加PCR循环的次数，在最后5个循环中可采用补加1倍用量的Taq DNA聚合酶，改变不对称引物比例等措施，有利于解决不对称PCR反应中ssDNA扩增效率低的问题。