二、cDNA探针

cDNA探针是以RNA为模板，在反转录酶的作用下合成的互补DNA，因此它不含有内含子及其他非编码序列，是一种较理想的核酸探针。cDNA探针包括双链cDNA探针和单链DNA探针。双链cDNA探针的制备方法是：首先从细胞内分离出mRNA，然后通过逆转录合成cDNA，再通过DNA聚合酶合成双链cDNA分子，再将双链cDNA分子插入载体中克隆、筛选、扩增、纯化，然后进行标记即可。单链DNA探针的制备相对来说要简单些，即将cDNA导入M13衍生载体中，产生大量单链jDNA，标记后即成。用单链DNA探针杂交，可克服双链cDNA探针在杂交反应中的两条链之间复性的缺点，使探针与靶mRNA结合的浓度提高，从而提高杂交反应的敏感性。