核酸探针的制备

核酸探针是指带有检测标记的已知核苷酸片段，能与互补核苷酸序列退火杂交，并可以被特殊的方法所探知。因此可用于待测核酸样品中特定基因序列的探测。

核酸分子杂交的基本原理是：具有一定同源性的两条核苷酸单链在一定条件下（适宜的温度及离子强度等）可按碱基互补原则退火形成双链，此杂交过程是高度特异性的。核酸分子杂交发生于两条DNA单链之间者（ssDNA∶ssDNA）称为DNA杂交；发生于RNA链与DNA链单链之间者（RNA∶ssDNA）称为RNA∶DNA杂交。因此，如果把一段已知基因（DNA或RNA）的核苷酸序列用合适的标记物（放射性同位素、荧光色素、生物素等）标记，当作探针与变性后的单链基因组DNA进行杂交反应，并用合适的方法（如放射自显影技术或免疫组织化学技术）把标记物检测出来，如果两者的碱基完全配对，它们即结合双链，从而表明被测基因组DNA中含有已知的基因序列（同源序列或片段）；检测不出结合则不含已知序列。该项技术不仅具有特异性、灵敏度高的优点，而且兼备组织化学染色的可见性和定位性，从而能够特异性地显示细胞的DNA或RNA，从分子水平去研究特定生物有机体之间是否存在着亲缘关系，并可揭示核酸片段中某一特定基因的位置。目前，这项技术已被广泛应用于分子生物学领域。近年来，随着食品微生物检测技术的发展，核酸探针技术已被越来越多地用于食品中沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、副溶血性弧菌等食源性病原菌的快速检测。

根据核酸分子探针的来源及性质，可将其分为基因组DNA探针、cDNA探针、RNA探针及人工合成的寡核苷酸探针等。