二、定量检测试剂
定量检测试剂是指可对特定分析物具体含量进行检测的试剂。定量检测试剂分析性能评估项目，通常包括准确度、空白限、检出限、定量限、分析灵敏度、线性范围、精密度、分析特异性等。下面对各项目的常见评估方法分别进行介绍，注册申请人也可根据产品特性采用其他方法，但要说明其科学合理性。
(一)准确度
准确度是指一个测量值与可接受的参考值之间的一致程度。准确度评估方法可参考《体外诊断试剂分析性能评估(准确度-方法学比对)技术审查指导原则》《体外诊断试剂分析性能评估(准确度-回收试验)技术审查指导原则》、《临床化学体外诊断试剂(盒)》(GB/T 26124—2011)、《核酸扩增检测用试剂(盒)》(YY/T 1182—2020)、Measurement Procedure Comparison and Bias Estimation Usin g Patient Samples，Approved Guideline(EP09c)等文件。
目前国内准确度研究方法常用的有偏差、方法学比对和回收试验3种。可根据实际情况选择其中一种或几种方法进行研究。
1.偏差 注册申请人可根据产品实际选择相对偏差或者绝对偏差进行评价。
(1)相对偏差：参考《临床化学体外诊断试剂(盒)》(GB/T 26124—2011)。用可用于评价常规方法的参考物质或有证参考物质(CRM)进行测试，重复检测3次，取测试结果均值(M)。或用由参考方法定值的高、中、低3个浓度的人源样品(可适当添加被测物，以获得高浓度的样品)对试剂(盒)进行测试，每个浓度样品重复检测3次，分别取测试结果均值(M)。按以下公式计算相对偏差(B)。
式中，M为测试结果均值；T为有证参考物质标示值，或各浓度人源样品定值。
(2)绝对偏差：参考《核酸扩增检测用试剂(盒)》(YY/T 1182—2020)，用试剂(盒)对参考物质或有证参考物质(CRM)按照符合《体外诊断医疗器械 生物样品中量的测量校准品和控制物质赋值的计量学溯源性》(GB/T 21415—2008)规定的溯源顺序进行测试，每个参考品重复测试(n≥2)，取测试结果(Mi)，按以下公式计算绝对偏差(Bi)。
式中，Bi为绝对偏差；Mi为测试结果，取对数；T为参考物质标示值，取对数；i=1，2，…，n。
或使用时，使用国家参考品作为样本进行检测，测定1次或多次；或使用企业参考品作为样本进行检测，每个样本测定1次或多次，按以上公式计算绝对偏差。
2.比对试验 参考《临床化学体外诊断试剂(盒)》(GB/T 26124—2011)，用不少于40个在检测浓度范围内不同浓度的人源样品，以生产企业指定的分析系统作为比对方法，每份样品按待测试剂(盒)操作方法及比对方法分别检测。用线性回归方法计算两组结果的相关系数(r)及每个浓度点的相对偏差。如采用已上市同类试剂作为参比方法，在实施方法学比对前，应对参比试剂进行初步评估和筛选，选择业内公认质量较好的试剂作为参比试剂。同时需确认拟研究试剂和参比试剂都分别符合各自相关的质量标准。
3.回收试验 参考《临床化学体外诊断试剂(盒)》(GB/T 26124—2011)，在人源样品(S 1)中加入一定体积标准溶液[标准溶液体积与人源样品体积比应不会产生基质的变化，加入标准溶液后样品(Si)总浓度必须在试剂(盒)检测线性范围内]或纯品，每个浓度重复检测3次，计算均值(Ci)，按如下公式计算回收率。
式中，Rn为回收率；Vi为加入标准溶液体积；V1为S1样品的体积；Ci为Si样品的测定浓度均值；C1为S1样品的测定浓度均值；Cs为标准溶液的浓度。
注意事项：
1.进行回收试验前，应该对待评价系统进行初步评价，并对待评价系统进行精密度及线性评价(参考相关标准)，只有在以上评价完成并且符合相关标准要求后，才可进行回收试验。
2.加入的纯品(或标准溶液)体积与人源样本体积比应不会产生基质的变化；建议通常小于原体积的10%。
3.标准溶液的浓度应该足够高，以得到不同浓度的回收样本。
(二)空白限
空白限是指测量空白样本时可能得到的最高测量结果，可反映试剂的背景信号。评估方法可参考《临床化学体外诊断试剂(盒)》(GB/T 26124—2011)。
1.空白吸光度 用纯化水或空白样本作为样本测试，在测试主波长下，记录测试启动时的吸光度(A 1)和约5分钟(t)后吸光度(A 2)，A 2测试结果即为试剂空白吸光度测定值，应符合相关标准要求(如有)或注册申请人给定范围。
2.空白吸光度变化率 对于速率法测试的试剂，用指定的空白液作为样本测试时，试剂空白吸光度变化率(ΔA/min)应不超过相关标准要求(如有)或注册申请人给定值。
(三)检出限
定量产品检出限，是用于描述一个检验程序以特定置信水平能报告为存在的被测量最低值，也可用于表示最小可检测浓度。采用空白样本重复测定20次，计算20次结果的均值
和标准差SD，
±2SD即为检测限，应符合相关标准要求(如有)或企业给定范围。
分子诊断产品建议使用国际参考品、国家参考品、标化的企业参考品进行梯度稀释并多次检测，将具有95%阳性检出率的浓度水平作为最低检出限。(https://www.daowen.com)
(四)定量限
定量限被用于描述一个检验程序以指定的测量不确定度能测量的被测量最低值。可参考《临床化学体外诊断试剂(盒)》(GB/T 26124—2011)、《酶联免疫吸附法检测试剂(盒)》(YY/T 1183—2010)、Evaluation of Detection Capability for Clinical Laboratory Measurement Procedures；Approved Guideline(EP17-A2)等文件。
定量限应高于或等于检出限，将多次(至少20次)测量的结果符合试剂准确度要求的最低浓度水平作为定量限。
(五)分析灵敏度
分析灵敏度是指校准曲线(或分析曲线)的斜率，斜率越大、直线越陡则灵敏度越高，可反映试剂区分浓度变化的能力。评估方法可参考《临床化学体外诊断试剂(盒)》(GB/T 26124—2011)。
用已知浓度或活性的样本进行测试，记录在试剂规定参数下产生的吸光度改变，换算为单位浓度吸光度差值(ΔA)或者吸光度变化[ΔA/(min·单位浓度)]，应符合相关标准要求(如有)或企业给定范围。
(六)线性范围
线性范围是指系统最终的输出值(浓度或活性)与被分析物的浓度成正比的范围。可参考Evaluation of the Iinearity of Quantitative Measurement Procedures；A Statistical Approach；Approved Guideline(EP06-A)、《临床化学体外诊断试剂(盒)》(GB/T 26124—2011)及相关行业标准。
建立试剂线性范围所用的样本基质应尽可能与临床实际检测的样本相似。建立线性范围时，需在预期测定范围内选择7～11个浓度水平。例如，将预期测定范围加宽至130%，在此范围内选择更多的浓度水平，然后依据试验结果逐渐减少数据点(建议最终不得少于7个水平)直至表现出线性关系，可发现最宽的线性范围。
(七)精密度
精密度是代表对一个均一样品的一系列测量结果的随机测量误差的性能特征，操作者、测量仪器、测量方法、试剂批号、校准品批号、地点、环境条件和时间均为可以变化的因素并影响测量精密度。可参考Evaluation of Precision of Quantitative Measurement Procedures；Approved Guideline(EP05-A3)、《临床化学体外诊断试剂(盒)》(GB/T 26124—2011)及相关行业标准。《临床化学体外诊断试剂(盒)》中对精密度的检测方法为：
1.重复性 选择至少2个浓度水平样本进行测试。如2个浓度的精密度有显著差异，建议增加为3个浓度。所选择样本浓度至少有一个浓度在医学决定水平左右。当临床实验室收集的样品不稳定或不易得到时，也可采用校准品或质控品。
在相同条件下对样本进行重复测定，至少进行20次重复测定，计算平均值¯X和标准差SD，按照如下公式计算变异系数CV。
2.批间差 用3个不同批号的试剂分别重复测试质控物质或正常临床样本，每个批号测试3次，分别计算每批试剂3次测试的均值，按照如下公式计算批间差：
《核酸扩增检测用试剂(盒)》(YY/T 1182—2020)中对精密度的要求为：按试剂(盒)说明书操作，用至少高、低2个浓度水平的样本各重复检测10次，其浓度对数值变异系数(CV，%)应≤5%。
注意事项：
1.精密度评价试验的研究者应能正确、熟练操作待评价的产品，及相关的仪器设备、校准品、质控品等。
2.试验开始前，宜先进行预试验，可进行简单的重复性试验，目的是检查测量系统是否按照预期运行。
3.精密度评价试验的整个过程中，应保证仪器设备稳定运行，可用质控样品进行监测或运行室内质控程序，建议每个分析批均要包含不同浓度样品。应做好记录，记录包括试验步骤、数据、结果等，对任何与规定程序的偏差、非预期结果应予以关注和记录。
4.试验过程中应实时检查数据的完整性和有效性。不能随意剔除数据，只有确认是由于操作失误、仪器异常(如漏吸样)、样品异常(如有气泡)等原因造成的错误数据，才可以剔除，同时，需重复该试验或增加分析批次以补充数据。若剔除数据较多时，应评估测量系统性能的稳定性及性能评价的适宜性。
(八)分析特异性
分析特异性是指在样品中有其他物质存在时检测/测量出目标分析物存在的能力，可反映产品抗内外源性及外源性干扰物质的能力。研究方法可参考Interference Testing in Clinical Chemistry；Approved Guideline(第3版，EP07-A3)、《干扰实验指南》(WS/T416—2013)。
一般采用将可疑干扰物质加入基础样本池以评价干扰效果，应根据实际情况选择干扰物质的种类。潜在的干扰物质来源包括内源的和外源的：①常见内源性物质有胆红素、血红蛋白、维生素C、三酰甘油等；②与检验原理相关的特异性干扰物质；③与检测物相关疾病的治疗药物；④普通的处方药及非处方药；⑤患者群体中常见的生化代谢物；⑥同类产品的干扰物质；⑦抗凝剂、防腐剂等样本采集或处理过程中的添加物；⑧标本采集及处理过程中接触的物质，如血清分离设备、导管、标本收集容器及塞子；⑨影响某些特定实验的膳食物质，如咖啡因、β-胡萝卜素、罂粟籽。
干扰物质对分析过程的影响，涉及如化学效应、物理效应、基质效应、酶的抑制及交叉反应等一个或多个因素。干扰物浓度的分布应覆盖人体生理及病理状态下可能出现的物质浓度。分析物实验浓度应选择至少2个浓度水平，在大多数情况下，可选择医学决定水平，参考范围的上、下限或病理浓度。