实验室检测方法
(一)临床标本检测
1.病原学检测
病原学检测主要适用于急性期血液标本。
(1)抗原检测
一般发病后6天内血液标本NS1抗原检出率高。标本中检出NS1抗原可以确诊病毒感染,适用于现场快速检测,可用于早期诊断(见附件14、附件15)。
(2)核酸检测
一般发病后6天内血液标本病毒核酸检出率高。在病人血清中检出病毒核酸,可确诊而且能够分型,可用于早期诊断,但核酸检测容易因污染而产生假阳性,因此要求严格分区操作(见附件16)。
(3)病毒分离
一般发病后5天内血液标本病毒分离率较高。将标本接种于蚊源细胞(C6/36)或哺乳动物细胞(BHK21、Vero)进行分离培养(见附件17),出现病变以后,用检测抗原或核酸的方法鉴定病毒。分离到登革病毒可以确诊,但其耗时长,不适于快速诊断。
2.血清学检测
血清学特异性抗体检测主要适用于发病5天以后血液样本,但要注意可能与其他黄病毒感染发生交叉反应。
(1)血清特异性IgM抗体(https://www.daowen.com)
采用ELISA、免疫层析等方法检测。IgM抗体阳性,提示患者可能新近感染登革病毒,适用于登革热早期诊断,但单份标本不能确诊(见附件18)。
(2)血清特异性IgG抗体
采用ELISA、免疫荧光(IFA)、免疫层析等方法检测。患者恢复期血清IgG抗体阳转或滴度较急性期呈4倍及以上升高可以确诊(见附件19、附件20)。
(3)中和抗体
采用空斑减少中和实验、微量中和实验等方法检测,可用于分型。患者恢复期血清中和抗体阳转或滴度较急性期呈4倍及以上升高可以确诊。
(二)媒介标本检测
1.标本处理
将分类后的伊蚊成蚊或幼虫,按照采集地点,每10~20只为一份进行研磨处理(见附件21)。
2.病毒核酸检测
用RT-PCR的方法进行登革病毒核酸检测(见附件16)。
3.病毒分离
病毒核酸阳性的标本进行病毒分离(见附件17)。