二、组培繁殖

二、组培繁殖

(一)外植体种类及处理

目前用于组织培养的迷迭香外植体有一年生嫩枝上的叶片、茎尖、茎段等。不同的外植体其处理方法不同。叶片:洗衣粉液浸泡,流水冲洗,75%乙醇浸泡30秒,用饱和漂白精溶液(过滤)浸泡17分钟,无菌水冲洗3~4次,取温室盆栽迷迭香顶芽,放在自来水冲洗30分钟,后用75%的乙醇浸泡10秒。用无菌水冲洗3遍后,加入0.1氯化汞溶液浸泡5分钟(每升溶液加吐温2滴),再用无菌水冲洗5~6遍(整个过程要不断搅拌)。最后将灭菌的材料在无菌的情况下放入无菌烧杯中备用。茎段选取生长健壮的枝条,去除叶片,投入洗衣粉溶液中清洗2遍,无菌水冲洗数次,然后在20毫克/升多菌灵溶液中浸泡,接着在超净工作台上进行以下无菌操作:第1次消毒用1克/升的氯化汞溶液浸3 分钟,用无菌水洗2次:之后进行第2次消毒,用1克/升的氯化汞溶液浸2分钟,再用无菌水洗5次,将消毒好的材料切成2.0~3.0 厘米长的小段(带2~3芽)。以上处理方法均能起到对外植体的消毒灭菌作用。迷迭香组织培养系统的建立可以实现迷迭香工厂化育苗。

(二)培养基选择

MS+1.0毫克/升2,4-D 培养基添加 20克/升蔗糖、7克/升琼脂,pH值调至 5.8。

(三)组培苗管理

移植应选择在春季和冬季比较好。将根长5~6 厘米有3~4片叶的试管苗移至炼苗棚7~10天。将瓶苗倒在盛有自来水的大盆里,轻轻洗去基部附着的培养基,注意不要损伤根系和茎叶,否则易引起试管苗腐烂死亡。将洗净的小苗直接移植于红壤土+砂(2∶1)的混合基质中,浇透定根水,并喷洒百菌清进行基质消毒。移栽6~l0天内,应适当遮阴,避免阳光直射,并注意少量通风,温度保持在25~28℃,相对湿度80%~96%,一般成活率可达85%以上。