1　材料和方法

1.1 研究对象 2005年2月至2010年5月陕西医大血液病研究院接诊来自全国各地血友病患者500例,男495例,女5例。中位年龄为14(0.4~77)岁。按照2000年全国止血与血栓会议标准,HA 411例,其中重型145例、中型170例、轻型96例;HB 79例,其中重型25例、中型39例、轻型151例。中、重型血友病共379例(75.8%)。自身获得性血友病10例,男女各5例,中位年龄为40(4~77)岁,以基础病变及诱因分类:过敏及自身免疫疾病引起者4例、感染3例、手术2例、妊娠1例。皮下血肿、尿血及肌肉出血各2例,鼻出血、月经过多、腹腔及关节出血各1例,中、低反应型抗体依次为4例、6例。

1.2 试剂 乏因子Ⅷ血浆、乏因子Ⅸ血浆及APTT试剂为德国美创公司(dade behring marburg gmbh)产品,0.025mol/L氯化钙、0.05咪唑缓冲液(pH酸碱度为7.37)及正常人混合血浆(质控血浆)购自上海太阳生物有限公司。

1.3 血友病凝血因子活性及抗体检测

稀释血浆制品:用咪唑缓冲液制备1∶1、1∶2、1∶3患者稀释血浆。

温育混合物的制备:对照管加对照质控血浆及缓冲液各0.2mL;受检管加1∶2稀释血浆及对照质控血浆各0.2mL;将上述3管置于37℃水浴箱温育2h。(https://www.daowen.com)

检测和结果计算:用一期法测定各种温育混合物的FⅧ:C及FⅨ:C。结果按下列公式计算:

剩余FⅧ:C%或FⅨ:C%(温育后FⅧ:C或FⅨ:C/温育前FⅧ:C或FⅨ:C)×100。

然后查表将剩余FⅧ:C或FⅨ:C换算成Bethesda单位(Bu/mL)[1]。

1.4 诊断标准 目前尚缺乏凝血因子抗体的统一诊断分类方法。我院采用2类3级反应型分类方法诊断:2类即特异性抗体(allo-antibody)和自身获得性(allo-antibody),3级即低反应型(抗体滴度＜5 Bu/mL)、中反应型(抗体滴度5~30 Bu/mL)、重反应型(抗体滴度＞30 Bu/mL)。

1.5 统计学分析 以SPSS10.0统计软件进行统计分析。