基因治疗的临床前研究

Paulk等研究认为婴幼儿肝脏快速增长(4倍),与婴幼儿AAV8血清阳性率低于成人来比,更影响载体转导基因治疗效果,因此,AAV载体转导基因治疗不适于婴幼儿[3]。为了克服AAV载体基因治疗安全性和持续性等方面的局限性,新的基因治疗方法不断出现。

3.1 慢病毒载体基因治疗 目前最有希望的是慢病毒载体携带FⅧ/FⅨ肝脏定向整合的基因治疗。Cantore等研究,非人灵长类动物慢病毒载体基因治疗FⅨ活性高达300%。慢病毒载体携带犬修饰FⅧ的基因治疗,FⅧ活性为30%~100%[4],因此,该疗法可开启婴幼儿血友病基因治疗。

3.2 基因编辑及修复 近年来,该疗法也得到了快速发展。其方法有原位修复致病基因和将目的基因敲入指定位点,异位表达2种方法。基因编辑有同源重组、锌指核酸酶(ZFN)、常间回文重复序列丛集、转录激活因子样效应用因子核酸酶(TALENS)和相关蛋白系统(CRISPR-Cas9)等技术,Barzel等将无启动子FⅨ基因靶向白蛋白基因及利用白蛋白启动子,提供染色体整合,二者均可终身表达,为新生儿和婴幼儿提供了基因治疗[2]。(https://www.daowen.com)

尽管基因治疗具有突破性创新,但还需要对血友病基因治疗的疗效、安全性和价值进行评估[1-2]。Alfonso等认为最终需要FDA和其他监管机构按照FⅧ/FⅨ水平和止血效果的判断标准进行疗效评估、认定[5]。除一般可预见的风险项目外,还应增加是否可引起其他疾病,特别是癌症,而且还需要大量患者和多年安全性评估。需要药物经济学标准的高效、低费及对整体血友病患者生活质量进行价值评估[6]。

另外,目前血友病基因治疗的最大威胁和失败原因是AAV诱发的先天性免疫反应。Gao等研究报告人类对灵长类动物和人类衍生的AAV血清抗体的发生率平均约为50%,二者之间具有高度同源性,有很大的交叉反应,诱发先天免疫反应灭活载体转导的FⅧ/FⅨ,引起肝脏严重毒性反应,使基因治疗失败[7-9]。

总之, 血友病FⅧ/FⅨ基因治疗取得了突破性成果,实现了血友病患者治愈的梦想,为单基因遗传病的治疗开启了先河;尽管如此,但安全性、效果和价值还需长期观察,新药、新疗法的局限性和高昂的费用还有待解决。