复方生血胶囊配制工艺的研究资料及文献资料
(一)处方
红参27g,黄芪68g,当归41g,川芎54g,熟地108g,海马54g,山楂54g,地榆54g,鸡血藤54g,女贞子54g,菟丝子68g,淫羊藿54g,阿胶27g,甘草27g。
(二)制法
以上14味药,红参、当归、川芎、海马、阿胶5味粉碎成细粉,过筛,混匀;其余熟地黄、黄芪、山楂等9味分别以10倍量水煎煮2次,每次2h,滤过,合并滤液,浓缩至相对密度为1.30~1.35(60℃)的清膏,加入上述细粉,混匀,干燥,粉碎,制粒,装胶囊,即得。
制备工艺路线见图13-13。
图13-13 制备工艺路线图
(三)剂型选择
复方生血胶囊处方具有补肾健脾、益气生血之功效,用于脾、肾、气、血虚所致之面色不华、倦怠乏力、腰膝酸软、头晕心悸等血虚证,主治再生障碍性贫血、营养不良性贫血、骨髓增生异常综合征、溶血性贫血等各种贫血。本处方原以汤剂形式使用,但汤剂需现用新制,久置易霉变,不便携带,口服剂量也较大,难以满足现代制剂疗效确切、质量可控、方便生产、方便临床用药等要求,且此类患者需要长期服药,故而做成口服制剂比较适合。目前常用口服剂为片剂、颗粒剂、胶囊剂等。因片剂崩解时限较长,颗粒剂成型需加入大量辅料,从而增大了服用量,而胶囊剂保持了汤剂作用迅速的特点,具有崩解快、服用剂量小的优点,又克服了片剂和颗粒剂的缺点,故选用胶囊剂较合适。
(四)工艺的合理性研究及工艺设计
复方生血胶囊由红参、黄芪、当归、川芎、熟地黄、海马、山楂、地榆、鸡血藤、女贞子、菟丝子、淫羊藿、阿胶、甘草14味中药组成。为了得到科学、合理的制备工艺路线,我们按照中医理论和临床用药的要求,对各味药物在处方中的作用进行了分析,着重考虑各药物所含有效成分的理化性质、药理作用以及制剂成型工艺的需要,并参考各药物在类似临床用途制剂的制备方法,多方面进行综合分析,确定本制剂制备工艺设计为:
(1)红参、当归、川芎、海马、阿胶粉碎成细粉入药;
(2)黄芪、熟地黄、山楂、地榆、鸡血藤、女贞子、菟丝子、淫羊藿、甘草水煎煮,合并水煎液,浓缩至清膏;
(3)将粉碎后的细粉与清膏混合,干燥,粉碎,制粒。
(五)工艺条件筛选
1.使用的仪器、试剂:高效液相色谱仪[Lab Alliance型恒流泵;Waters966二极管阵列检测器,活德国际贸易(上海)有限公司;Millennium 32色谱工作站]、Diamosil C18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm)、超声波清洗机(H66025T)、BP211D型分析天平(德国赛多利斯)、WS70-1型红外快速干燥箱(上海市吴淞五金厂)、FW135型粉碎机(天津市泰斯特仪器有限公司)、101型电热鼓风干燥箱(北京市永光明医疗仪器厂)、HCTP11B10架盘药物天平(北京市宣武区天平厂)。甲醇、乙腈为色谱纯,水为纯净水,其他试剂均为分析纯。淫羊藿苷对照品(供含量测定用,110737-200415)购自中国药品生物制品检定所。
2.药材的粉碎:从工艺设计可知,红参、当归、川芎、海马、阿胶5味药材粉碎成细粉后与提取物混合,填充成胶囊。出粉率考察,按比例称取上述5种药材,混合粉碎成细粉,称取重量,计算出粉率(表13-30)。
表13-30 实验室粉碎出粉率考察
结果显示,3批出粉率结果接近(平均值为90.9%),说明该法稳定可行。
3.提取部分工艺筛选:
(1)实验设计:从资料分析可知,黄芪、熟地黄、山楂、地榆、鸡血藤、女贞子、菟丝子、淫羊藿、甘草9味药进行水煎既有利于有效成分的溶出,又不增加生产成本,因此我们将其设计为水煎部分,通过正交试验,以淫羊藿中的淫羊藿苷含量为考察指标,并结合干浸膏得率进行综合分析,重点对提取次数、加水量和提取时间进行考察,以确定最佳提取条件。
(2)因素水平的确定及正交表的选择:影响水提取的主要因素有提取时间、加水量和提取次数,通过多因素的正交试验,优选水提取工艺的各项工艺参数。根据预试验结果,各选择3个水平,以L9(34)表安排实验,因素与水平见表13-31。
表13-31 水提取工艺正交试验因素水平表
(3)试验方法:按处方比例称取黄芪15g,熟地黄24g,山楂12g,地榆12g,鸡血藤12g,女贞子12g,菟丝子15g,淫羊藿12g,甘草6g共9份,随机编成1~9号,按L9(34)正交表(表13-32)安排进行试验,提取液滤过,测量总体积,备用。
(4)干浸膏制备:精密量取上述各提取液50mL,分别置于已恒重的蒸发皿中,水浴蒸干,残渣于105℃的环境中干燥3h,取出,置于干燥器中放置30min,称重计算,结果见表13-32。
(5)淫羊藿苷的含量测定:参照《中华人民共和国药典》2010年版一部淫羊藿苷含量测定法测定。
色谱条件。色谱柱:Diamosil C18(4.6mm×250mm,5μm);流动相:乙腈∶水(27∶73);流速:1.0mL/min;柱温:25℃;检测波长:270nm。
对照品溶液的制备。精密称取淫羊藿苷对照品适量,加75%的甲醇制成每1mL含0.1024mg的溶液,即得。(https://www.daowen.com)
供试品溶液的制备。精密量取每个正交试验所得的水提液5mL于10mL的量瓶中,用甲醇稀释至刻度,摇匀,滤过,即得。
样品含量测定。依据《中华人民共和国药典》2010年版一部附录ⅥD法,分别精密吸取对照品溶液及供试品溶液各10μL,注入液相色谱仪,测定,结果见表13-32。
表13-32 正交试验安排和数据分析表
▲:综合评分=(淫羊藿苷量/最大淫羊藿苷量)×70+(出膏率/最大出膏率)×30。
(6)方差分析:依据表13-32正交试验安排和数据分析中的数据,进行方差分析,结果见表13-33。
表13-33 方差分析表
直观分析显示,影响提取效果因素顺序为提取次数(C)＞提取时间(C)＞加水量(A);从方差分析可知,因素A、B、C均无显著影响;为节省工时,降低能耗,并考虑到因素B和因素C、水平2和水平3之间差距不大,确定最佳工艺组合为A3B2C2。即加水10倍量,煎煮2次,每次2h。
(7)验证实验:提取最佳工艺组合不在9个试验中,为此进行了验证实验,结果见表13-34。
表13-34 验证实验结果
从验证结果来看,淫羊藿苷含量及干膏得率均接近于或超过正交表中最高的一次试验,说明选择的工艺相对稳定合理。
4.成型工艺筛选:
(1)润湿剂的选择:本品为胶囊剂,崩解时限的长短及装量差异的大小是衡量该制剂的质量是否符合要求的重要指标,为了获得符合标准的药品,我们对其进行制粒,以增加其流动性。由于本制剂为药材提取物与药材原粉制成的制剂,故选择乙醇为润湿剂,采用不同浓度的乙醇进行试验,结果见表13-35。
表13-35 润湿剂的选择结果
结果表明,选用80%的乙醇作润湿剂较好。
(2)润滑剂的选择:现常用的润滑剂为硬脂酸镁,本品制成颗粒后,为保证胶囊剂的装量差异符合规定,我们通过颗粒流动性试验来确定是否加入润滑剂及其最佳用量。
同一批干颗粒,加入不同量的硬脂酸镁(%),测得颗粒的流动性(休止角α)结果见表13-36。
表13-36 硬脂酸镁用量试验结果
试验结果表明:加入硬脂酸镁后,颗粒的流动性好;但不加硬脂酸镁,颗粒的流动性也较好,可以满足生产过程中的流动性需求。为节约成本,并减少患者的服用量,确定不加润滑剂。
(六)中试研究
1.中试工艺:处方中的14味药材,红参、当归、川芎、海马、阿胶5味粉碎成细粉,过筛,混匀;其余熟地黄、黄芪、山楂等9味分别以10倍量水煎煮2次,每次2h,过滤,合并滤液,浓缩至相对密度1.30~1.35(60℃)的清膏,加入上述细粉,混匀,干燥,粉碎,制粒,装胶囊,即得。
2.中试生产数据:按上述制备工艺,进行3批中试放大试验,每批总投料量为制剂处方量(1000粒)的10倍,试制出3批中试产品,批号分别为20130301,20130302,20130303,试验数据及中间参数见表13-37。
表13-37 三批中试试验结果
由3批样品中试结果可知,该工艺重复性好,收率稳定,适合工业化生产,表明该工艺是符合生产要求的。