质量研究的试验资料及文献资料
复方血友胶囊是由当归、川芎、白芍、生地、红参、黄芪、紫河车、苍术、仙鹤草、海马、茜草、白茅根、延胡索、甘草共14味中药制成。该方药味成分复杂,其性质各不相同,根据申报要求,现将抗纤丸有关的文献资料及研究资料归纳总结如下。
(一)现代药理研究
1.当归的药理作用:
(1)当归具有抗炎镇痛及抗损伤作用:当归水浸膏口服可抑制大鼠被动皮肤过敏PCA反应及漏出色素量。当归水煎液对多种致炎剂引起的急、慢性炎症均有显著的抑制作用,摘除双侧肾上腺后其抗炎作用仍然存在;并能降低大鼠炎症组织PGE2的释放量,降低豚鼠补体旁路溶血活性,但不能拮抗组织胺的致炎作用。
(2)本品水提物能降低血管通透性,小鼠口服185.9mg(生药)/kg对血管通透性的ID50与口服乙酰水杨酸钠201.1mg/kg作用相当,即其作用为后者的1.1倍,且亦似乙酰水杨酸钠能抑制血小板中致炎物质如5-HT的释放,从而产生消炎作用。
(3)本品水提物及乙酰水杨酸钠对腹腔注入醋酸引起扭体反应的ID50分别为65.9(生药)mg/kg和114.3mg/kg,说明本品阵痛作用强度约为乙酰水杨酸钠的1.7倍,当归口服或局部应用于不同原因引起的家兔急性浮肿,显示抗浮肿作用。
(4)抗菌作用:当归煎剂在试管内对大肠杆菌、伤寒及副伤寒杆菌、痢疾杆菌、霍乱弧菌、变形杆菌、甲型及乙型溶血性链球菌、白喉杆菌有轻度抑制作用。其挥发油对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、福氏痢疾杆菌、铜绿假单胞菌等感染小鼠预防性给药或感染后治疗,均有较好的抑制作用。
(5)抗辐射损伤作用:预防性给予当归多糖对受辐射照射小鼠的造血组织有一定的辐射防护作用;当归多糖对受照小鼠的造血细胞亦有辐射防护作用。
(6)抗氧化和清除自由基的作用:其中所含阿魏酸通过直接消除自由基、抑制氧化反应和自由基反应,以及与生物膜磷脂结合保护膜脂质等多种机理拮抗自由基对组织的损害。根据有效成分性质及药理作用,以水提取入药。
2.白芍的药理作用:
(1)抗炎作用:实验表明,白芍总苷可以抑制大鼠角叉菜胶性足肿胀、弗氏完全佐剂引起的大鼠足爪肿胀以及大鼠佐剂性关节炎。进一步的研究发现,切除松果腺的大鼠给予白芍总苷,可使松果腺切除引发的足爪过度肿胀得以抑制。另外,白芍总苷可以对抗D-半乳糖胺或四氯化碳所致的小鼠肝损伤,如血清谷丙转氨酶升高、血清白蛋白下降及肝糖原含量下降,并可明显改善形态学上肝细胞的变性和坏死,而且对乙醇诱导的血清转氨酶的升高亦有抑制作用。
(2)免疫调节作用:在不同的病理状态下,白芍总苷对异常的免疫功能具有双向调节机制。在小鼠的实验中,对环磷酞胺降低的迟发型超敏反应有恢复作用,而对环磷酞胺增高的迟发型超敏反应则有抑制作用。在佐剂型关节炎大鼠模型、系统性红斑狼疮小鼠模型和多种肝损伤模型上,白芍总苷可在不同程度上调节机体的免疫功能紊乱,包括对免疫应答的多个环节产生作用,而且作用特点呈功能和浓度剂量依赖性的双向免疫调节。以水提取入药。
3.黄芪的药理作用:黄芪能提高人体免疫力,具有抗疲劳、抗衰老作用,并且有扩张血管和扩张冠脉作用。
4.川芎的药理作用:
(1)对心、脑血管系统的作用:①对心脏的作用:川芎嗪对离体豚鼠灌流心脏产生剂量依赖性抑制心肌收缩和增加冠脉流量。川芎嗪对麻醉兔心肌缺血再灌注所致心肌损伤和心肌顿抑有保护作用。②对脑血管的作用:川芎嗪能显著增加缺血大鼠血浆中NO含量,降低MMS总量和组织中MDA的含量,降低血比黏度,对大鼠缺血性再灌注损伤具有保护作用。③对冠脉循环的作用:川芎水提物及生物碱能扩张冠脉,增加冠脉流量,改善心肌缺氧状况。给麻醉犬静注川芎嗪后,冠脉及脑血流量增多,冠脉、脑血管、外周阻力降低。川芎嗪也能显著增加清醒小鼠的冠脉流量。④对外周血管及血压的作用:川芎总生物碱、川芎嗪能降低麻醉犬的外周血管阻力。川芎生物碱、酚性部分和川芎嗪能抑制氯化钾和肾上腺素对家兔离体胸主动脉条的收缩作用。川芎浸膏、水浸液、乙醇水浸液、乙醇浸出液和生物碱对麻醉犬、猫、兔不论肌注或静注均有显著而持久的降压作用。水浸液给高血压犬或大鼠灌胃,也有明显的降压作用。
(2)对血小板聚集、血栓形成和血液黏滞度的影响:川芎嗪能延长体外 ADP诱导的血小板聚集时间,对已聚集的血小板有解聚作用,还有提高红细胞和血小板表面电荷,降低血黏度,改善血液流变的作用。阿魏酸能抑制血小板TXA2的释放,对其活性有直接的拮抗作用,还能升高血小板内cAMP含量,抑制血小板聚集。
(3)延缓慢性肾损害的作用:川芎嗪能够显著增加肾血流量,减轻兔肾热缺血模型的肾组织损伤,还能提高膜性肾炎家兔肾组织的SOD活性,减轻肾组织细胞的脂质过氧化损伤。
(4)对平滑肌的作用:家兔离体妊娠子宫实验证明,川芎浸膏能增强子宫收缩,形成痉挛,大剂量反而使子宫麻痹,收缩停止。
5.甘草的药理作用:
(1)对消化系统的作用:除去甘草酸的浸膏及甘草中黄酮甙类对大鼠实验性溃疡有明显的保护作用。
(2)肾上腺皮质激素样作用:甘草浸膏、甘草酸及甘草次酸对健康人及动物都有促进钠、水潴留的作用;小剂量甘草酸(每只100μg )能使大鼠胸腺萎缩及肾上腺重量增加,产生糖皮质激素可的松样作用。大剂量时则糖皮质激素样作用不明显,只呈现盐皮质激素样作用。
(3)解毒作用:甘草浸膏及甘草酸对某些药物中毒、食物中毒、体内代谢产物中毒都有一定的解毒能力。解毒作用的有效成分为甘草酸,解毒机制为甘草酸对毒物有吸附作用,甘草酸水解产物葡萄糖醛酸能与毒物结合,以及甘草酸有肾上腺皮质激素样作用,增强肝脏的解毒能力等方面因素综合作用的结果。
(4)止咳平喘作用:甘草次酸有明显的中枢性镇咳作用,大剂量的甘草次酸可使小鼠呼吸抑制。此外甘草酸、甘草次酸盐尚有抗炎症及抗过敏、抗肝损伤、抗促癌、抗菌、抗艾滋病病毒(甘草酸)作用。
6.地黄的药理作用:地黄多糖可促进正常小鼠骨髓造血干细胞的增殖,刺激其造血功能,并对放射损伤有一定的保护和促进恢复作用。地黄低聚糖也能增强小鼠的造血干细胞。地黄多糖b有明显的免疫调节活性,能使Lewis肝癌细胞内P53基因的表达明显增加,从而对地黄多糖的抗肿瘤机理从基因水平上找到了依据。鲜地黄汁、鲜地黄及干地黄水煎液均有拮抗阿司匹林诱导的小鼠凝血时间延长,其中鲜地黄汁的作用明显强于干地黄。地黄水提取液有明显降压作用,对寒冷情况下的血压则有稳定作用。从而显示地黄对血压具有双向调节作用。另外,地黄低聚糖不仅可以调节实验性糖尿病紊乱,亦可调节生理性高血糖状态。地黄水提液还可抑制胃酸分泌和抗溃疡,有镇定作用等。在该制剂中地黄以水煎入药。
7.延胡索的药理作用:
(1)镇痛作用:延胡索甲素、乙素、丙素对小鼠、大鼠、兔均具有镇痛作用,以乙素效果最为明显。
(2)镇静,催眠与麻醉作用。
(3)其他作用:抗溃疡作用。脱氢延胡索碱是延胡索中治疗冠心病的主要有效成分,具有扩张冠状血管,提高冠脉血流量,改善心肌营养性血流量,增强心肌耐缺氧能力以及保护心肌缺血、坏死等作用。
延胡索有效成分(延胡索乙素)的药理作用明确且水溶性好,故采用水煎煮的方法。
8.红参的药理作用:(https://www.daowen.com)
(1)红参对中枢神经系统具有兴奋作用,而大量时反而有抑制作用。能加强动物高级神经活动的兴奋和抑制过程。并能增强机体对一切非特异性刺激的适应能力,可减少疲劳感(红参的根、茎、叶均能延长小白鼠游泳的持续时间)。
(2)红参对心肌及血管有直接作用,一般在小剂量时兴奋,大剂量时抑制。10%红参浸液1mL/kg给猫(或兔)灌胃,对心肌无力有一定的改善作用。复温期间有相当程度的恢复。亦有抗过敏性休克及强心的作用。红参对大鼠心肌细胞膜三磷酸腺苷酶活性有抑制作用。
(3)加强机体对有害因素的抵抗力。
(4)对因肾上腺素引起的高血糖动物有降低血糖的作用。对糖尿病患者除能自觉改善症状外,还有轻微的降血糖作用,并与胰岛素有协同作用。
(5)刺激造血器官,有改善贫血的作用。
(6)在适当剂量,对家兔也能增加体重,使血浆白蛋白与球蛋白的比值上升。
9.紫河车的药理作用:为健康人类的胎盘。胎盘含蛋白质、糖、钙、维生素、免疫因子、女性激素、黄体酮、类固醇激素、促性腺激素、促肾上腺皮质激素等。胎盘含有与血液凝固有关的成分,其中有类似凝血因子Ⅷ的纤维蛋白稳定因子,尿激酶抑制物(有抑制尿激酶活化纤维蛋白溶酶原的作用)和纤维蛋白溶酶原活化物。以粉末入药。
10.苍术的药理作用:
(1)抗缺氧作用:用氰化钾所致小鼠缺氧模型证明,苍术丙酮提取物750mg/kg灌胃能明显提高小鼠存活时间,降低相对死亡率。苍术的抗缺氧主要活性成分为β-桉叶醇。
(2)对心血管的作用:苍术对蟾蜍心脏有轻度抑制作用,对蟾蜍后肢血管有轻微扩张作用。苍术浸膏小剂量静脉注射,可使家兔血压轻度上升,大剂量则使血压下降。
(3)中枢抑制作用:苍术挥发油少量对蛙有镇静作用,同时使脊髓反射亢进;较大量则呈抑制作用,终至呼吸麻痹而死。其抑制成分主要是β-桉叶醇和茅苍术醇。
(4)对肝脏的影响:苍术水煎剂每天10g生药/kg连续给小鼠灌胃7d,能明显促进肝蛋白的合成。生药及其所含苍术醇、苍术酮、β-桉叶醇对四氯化碳诱发的一级培养鼠肝细胞损害均有显著的预防作用。
(5)对血糖的影响:将苍术煎剂或醇浸剂8g/kg口服或皮下注射,使正常家兔血糖略有上升。用其煎剂10g/kg灌胃,亦得到同样效果;但用同剂量煎剂灌胃,对四氧嘧啶性糖尿病家兔则血糖略升后即下降,灌药后的10d内,血糖不断下降,差别显著,停药7~14d,血糖未见上升到用药前水平。苍术苷对小鼠、大鼠、兔有降血糖作用,同时降低肌糖原和肝糖原,抑制糖原生成,使氧耗量降低,血乳酸含量增加,其降血糖作用可能与其对体内巴斯德效应(pasteur effect)的抑制有关。它和腺嘌呤核苷酸在同一线粒体受点上起竞争性抑制作用,从而抑制细胞内氧化磷酸化作用,干扰能量的转移过程。
11.仙鹤草的药理作用:
(1)止血作用:现代药理研究结果对仙鹤草能否止血尚无定论。曾有报告,小鼠静脉注射仙鹤草素后, 出血时间缩短45%。给104只兔分别静脉注射仙鹤草钠盐2mg/kg,可使血小板数量增加、血清钙含量增加及凝血时间缩短。以仙鹤草制成粉剂,用于外伤出血、内脏手术时出血或渗血有肯定疗效。亦有报告认为,该品浸剂及仙鹤草注射液,不论体外还是体内实验,均无促进血凝作用。该品所含仙鹤草素A、B、C 及另一种酚性松脂酸, 均无促血凝作用。
(2)对心血管系统的作用:该品浸剂和仙鹤草素对离体蛙心, 均有强心作用;能增加蛙和蟾蜍的心率和收缩强度。而水提取部分的醇提取物对离体蛙心则有抑制作用。仙鹤草乙醇浸膏给麻醉兔、犬静脉注射,可使血压上升。而其水提取部分的醇提取物则使家兔的血压下降;给兔和蛙后肢血管灌流, 低浓度使血管收缩,高浓度则使血管扩张。仙鹤草浸剂及水提取物给兔耳血管灌流, 低浓度时无影响,高浓度时则呈扩张反应, 并能对抗肾上腺素的缩血管作用。
(3)其他作用:仙鹤草水提取物及酸水提取物对电刺激齿髓的家兔痛觉有抑制作用。仙鹤草素能降低小鼠和兔红细胞的脆性, 略有降低大鼠基础代谢的作用。其醇溶性浸出物能兴奋呼吸中枢,对骨骼肌也有兴奋作用, 能使已疲劳的骨骼肌恢复兴奋。
12.茜草的药理作用:
(1)止血作用:茜草根温浸液能缩短家兔出血和凝血时间,炒炭后作用更显著。
(2)止咳、祛痰作用:茜草根煎剂给小鼠灌胃,有止咳、祛痰作用。
(3)对平滑肌的作用:对离体兔回肠,茜草根煎剂能对抗乙酰胆碱的收缩作用。根的水提取物对离体豚鼠子宫有兴奋作用,产妇口服亦有加强子宫收缩的作用。在小鼠离体小肠实验中,紫茜素、茜素无明显解痉作用
(4)其他作用:茜草制剂能治疗膀胱结石。其对由镁和胺构成的结石有一定的溶媒作用,但对膀胱结石实际上并无多大作用,机制可能是兴奋膀胱肌肉,从而帮助结石的排除。对大鼠的实验性肾或膀胱结石的形成,也有某些抑制作用。
13.白茅根的药理作用:
(1)止血作用:白茅根可加速凝血过程的第二阶段, 即促进凝血酶原的形成,因而有止血作用。有人认为, 白茅根的止血作用在于能缩短出血及凝血时间。
(2)其他作用:白茅根水浸液有降低血管通透性的作用。
(二)质量标准研究
1.为方中当归、川芎的鉴别:取本品内容物5g(批号:201303101、20130302、20130303),加乙醚20mL,超声处理20min,过滤,滤液蒸干,残渣加乙醇1mL使溶解,作为供试品溶液。另取当归对照药材及川芎对照药材粉末各1g,同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(《中华人民共和国药典》2010版一部,附录Ⅵ B)试验,吸取上述溶液各10μL,分别点于同一硅胶G薄层板上,以正己烷—醋酸乙酯(4∶1)为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点。此法专属性及重复性好,空白无干扰,故纳入标准正文。
2.为方中延胡索的鉴别:取本品内容物5g(批号:201303101、20130302、20130303),加甲醇50mL,超声提取30min,过滤,滤液蒸干,残渣加水10mL使溶解,加浓氨试液调至碱性,用乙醚振摇提取3次,每次10mL,合并乙醚液,蒸干,残渣加甲醇1mL使溶解,作为供试品溶液。另取延胡索对照药材1g,加甲醇10mL,同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(《中华人民共和国药典》2010版一部,附录Ⅵ B)试验,吸取上述溶液各5μL,分别点于同一硅胶G薄层板上,以甲苯-丙酮(9∶2)为展开剂,展开,取出,晾干,置碘缸内熏3min,取出,置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点。本法专属性及重复性好,空白无干扰,故纳入标准正文。
3.为方中白芍的鉴别(批号:201303101、20130302、20130303):取本品内容物3g,加乙醇10mL,振摇提取5min,过滤,滤液蒸干,残渣乙醇1mL使溶解,作为供试品溶液。另取芍药苷对照品适量,加甲醇制成1mg/mL的溶液。另取白芍对照药材1g,同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(《中华人民共和国药典》2010版一部,附录Ⅵ B),吸取上述溶液各10μL,分别点于同一硅胶G薄层板上,以三氯甲烷-醋酸乙酯-甲醇-甲酸(40∶5∶10∶0.2)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以5%的香草醛浓硫酸溶液,105℃加热至斑点显色清晰,供试品中在与对照品色谱和对照药材色谱相同的位置上,均未出现相同颜色的斑点。故不纳入标准正文。