临床级NK细胞的大规模扩增、分子免疫调控及其传统中药干预

主要完成人 朱诗国 姚 超 李 雁 王莉新 龚陈媛

完成单位 上海中医药大学、上海市中医医院

自然杀伤细胞（NK细胞）是机体固有免疫和适应性免疫的重要桥梁，在机体抗感染性疾病和恶性肿瘤免疫监视过程中发挥重要作用。在人类，NK细胞被定义为CD3-CD56+/CD16+的大颗粒淋巴细胞，占外周血单核细胞的10%～15%。大量研究表明，过继NK细胞治疗能产生明显的抗肿瘤效应，且不会产生移植物抗宿主疾病，是一种极具前途的恶性肿瘤治疗新方法。然而，NK细胞治疗临床应用仍有许多困难，其主要障碍是：①NK细胞数目较少，仅占外周血单核细胞的少部分，难以满足巨大的临床需要；②肿瘤细胞具有免疫逃逸特性，能够逃避NK细胞免疫监视。因此，要进行有效的NK细胞免疫治疗，首先必须在体外进行NK细胞的大规模扩增以满足临床需要，之后是提高NK细胞对肿瘤的识别与杀伤。本项目通过建立体外扩增技术大规模扩增临床级NK细胞，首先从数目上保证了NK细胞的临床供给。在此基础上，进一步阐明NK细胞活化的分子免疫调控机制及其传统中药干预，为提高NK细胞抗肿瘤效应提供理论基础和潜在中药有效成分。

本项目的创新点：①建立了具有自主知识产权的人类NK细胞大规模扩增技术。本项目通过体外扩增技术可以大规模扩增NK细胞，以满足临床需求，为临床上NK细胞免疫治疗恶性肿瘤提供一定的前期基础；②在国际上率先揭示了NK细胞内HDAC3-STAT3-NKG2D分子信号通路。这一分子信号通路的初步确立对阐明NK细胞主要激活性受体NKG2D的分子调节机制具有重要意义；③建立了评价NK细胞抗肿瘤效应的高通量筛选体系。在国际上率先发现玉屏风散、3，20-二安息香酸巨大戟萜醇（IDB）、楝酰胺（Rocaglamide，Roc A）等能够显著增强NK细胞的抗非小细胞肺癌效应。玉屏风散可以通过增强NK细胞活性，发挥对Lewis肺癌的抑制作用；IDB能够激活PKC，增强NK细胞的IFN-γ分泌和脱颗粒效应，增强NK细胞介导的肿瘤杀伤；Roc A能够通过抑制ULK1蛋白翻译从而抑制非小细胞肺癌细胞（NSCLC）自噬，阻断肿瘤细胞内NK细胞来源颗粒酶B的降解，增强NK细胞介导的NSCLC细胞杀伤。