双光子激光扫描共聚焦显微镜

鉴于单光子共聚焦荧光成像技术在活体组织光学成像中的局限性，Denk等于1990年开创性地提出了双光子荧光显微概念，为活体组织光学成像提供了新的思路，后来又发展出多光子荧光成像技术，进一步拓展了荧光成像技术在临床医学上的应用。相比于传统的单光子共聚焦荧光成像技术，双光子或多光子荧光成像技术的优势在于：对生物样品的光损伤小，延长了有效观测时间，便于长时间活体观测和研究；使用长波长激光，在活体组织中散射系数较小，提高了组织穿透深度，从而可获取深层组织的清晰荧光图像；荧光收集率高，增强了图像对比度；对光路收集系统的要求低，光学系统相对简单（图5-5）；可以利用单一波长的激发光同时激发多种染料，从而得到同一生命现象中的不同信息，便于相互对照、补充。因此，多光子荧光成像技术在活体组织成像，尤其是皮肤组织的成像中得到了广泛的应用。近年来，该技术在临床诊断方面也取得了突破，基于多光子层析成像的皮肤检测系统在早期皮肤癌诊断、皮肤衰老检测等方面均有应用。(https://www.daowen.com)