常见非结核分枝杆菌

六、常见非结核分枝杆菌

1.龟分枝杆菌 1903年,Friedmann首次报道并描述此菌,名为龟结核杆菌。包含龟分枝杆菌脓肿亚种、龟分枝杆菌牛亚种、龟分枝杆菌龟亚种。长短不一的杆菌,形态呈多形性,还可呈球形。在多数培养基上3 d后可形成光滑、湿润菌落,有时为粗糙型菌落;罗氏培养基上3 ~4 d生长为无色或淡黄色、光滑、湿润菌落。但某些证据表明初次分离培养时,需要几周才生长。传代培养生长5 d之内菌落涂片抗酸性强,5 d后逐渐失去抗酸性。

2.脓肿分枝杆菌复合群(MABC) MABC属于快速生长型非结核分枝杆菌,包含3个亚种,分别为:脓肿分枝杆菌脓肿亚种、脓肿分枝杆菌博莱亚种、脓肿分枝杆菌马赛亚种。菌落形态分为光滑型和粗糙型,从肺部感染患者中分离出的脓肿分枝杆菌大多为粗糙型。目前发现导致其形成两种菌落形态的主要原因是在粗糙型的细胞壁中,糖肽磷脂类物质含量较低。MABC所引起的肺部感染等疾病症状与结核病非常相似。65%~80%的快速生长分枝杆菌(RGM)引起的NTM肺病主要是由MABC感染导致。MABC对一线抗结核药物天然耐药,并且三者的体外药物敏感性试验(简称药敏试验)结果不同,准确鉴定脓肿分枝杆菌复合群非常必要。3个亚种的16S rRNA序列极为相似,不能通过16S rRNA基因片段进行区分,目前国外多推荐采用rpoB和hsp65基因序列作为区分上述3个亚种的方法。

3.偶发分枝杆菌 此菌包含偶发分枝杆菌去乙酰胺亚种、偶发分枝杆菌偶发亚种两种。偶发分枝杆菌菌体呈多形态,其抗酸程度不同。在脓液中,菌体长并有丝状类型,有些则呈现明显的分枝。在中性罗氏培养基上菌落大、粗糙,液体培养为索状排列,常与人型分枝杆菌非常相似,与人型分枝杆菌不同为:该菌生长快速,3 d即生长,在普通琼脂培养基上能生长。

4.耻垢分枝杆菌 由Lustgarten于1884年从梅毒患者的硬下疳和梅毒瘤中分离获得。1年后,Alvarez和Tavel在健康人生殖器分泌物中也发现了与Lustgarten描述相似的微生物,耻垢分枝杆菌据此得名。此菌属快速生长菌,生长速度是结核分枝杆菌10倍,罗氏培养2 ~4 d,可形成粗糙型菌落,或为乳白色光滑型菌落。可引起皮肤软组织感染,对于正常个体,耻垢分枝杆菌基本可视作非致病菌。

5.鸟分枝杆菌 包含鸟分枝杆菌鸟亚种、鸟分枝杆菌副结核亚种、鸟分枝杆菌森林亚种。属于缓慢生长菌,罗氏培养产生3种菌落即:① 圆形、光滑、不透明突起的菌落;② 光滑、透明扁平菌落;③ 粗糙型菌落。艾滋病患者标本中分离出的菌株多为光滑、奶油样菌落,依据菌龄长短,产生不同程度的黄色色素。抗酸染色着色均匀,呈短粗球杆状,液体培养涂片染色为散在分布,无索状结构。

6.嗜血分枝杆菌 缓慢生长菌。抗酸性强,菌体短而弯曲。营养要求高,普通罗氏培养基上不生长。它是分枝杆菌属中唯一的需氯化血红素和其他铁源生长的菌种。适宜生长温度为28 ~32℃,含10% CO2的环境可刺激其生长,可以在巧克力琼脂、5%羊血哥伦比亚琼脂或含有2%枸橼酸铁铵的罗氏培养基上生长,不产生色素。

7.胞内分枝杆菌 包含胞内分枝杆菌胞内亚种、胞内分枝杆菌莲建洞亚种。室温生长缓慢,菌落以光滑型、非光产色为主。在显微镜下,可见菌体呈多形态,而常规培养菌体通常呈现具有双极抗酸颗粒的短杆状。由于胞内分枝杆菌和鸟分枝杆菌几乎难以鉴别,因此常统称为复合体。胞内分枝杆菌和鸟分枝杆菌最适生长温度是40℃,30 ~40℃可生长。胞内分枝杆菌和鸟分枝杆菌遍布于全世界,可在水、土壤、乳制品以及鸟类和哺乳动物的组织中分离到。

8.日内瓦分枝杆菌 缓慢生长菌,不产色素,常常引起艾滋病患者中的播散性感染。在罗氏培养基、7H11琼脂上不生长,仅在肉汤培养基中生长(6 ~8周)。对大多数抗生素敏感,只对异烟肼耐药。

9.堪萨斯分枝杆菌 属慢生长、光产色菌,光暴露后产生黄色色素,最适生长温度为32℃。堪萨斯分枝杆菌比人型分枝杆菌长而宽,着色或未着色部位常呈现带状,通常以弯曲的索状排列。该菌在含甘油的培养基上37℃保持2周即生长。培养在暗处,菌落则呈微白色,与人型分枝杆菌非常相似,只是表面较光滑,曝光后即产生黄色菌落。对动物的致病力非常有限,大多数实验动物只产生局部病灶,是最常见的对人致病的非典型分枝杆菌之一,对人的致病性可能比其他的任何非典型分枝杆菌都强,该菌引起肺内和肺外疾病,最易侵犯肺部。与人型分枝杆菌引起的疾病几乎难以区别。在某些情况下,该菌在丙酮酸钠培养基上不生长。

10.戈登分枝杆菌 戈登分枝杆菌是一种慢生长、暗产色的非结核分枝杆菌,罗氏培养基上为橘黄色菌落。传统上被认为是一种临床意义不大的非致病性环境分枝杆菌。它可以从各种环境中分离出来,包括土壤和自来水。随着时间的推移,越来越多的病例报告将戈登分枝杆菌作为皮肤和其他部位感染的致病菌。

11.海分枝杆菌 此菌为慢生长、光产色菌,存在海水和淡水中。最适宜的生长温度为30 ~32℃,37℃初代生长不良,传代培养时可在37℃生长,罗氏培养8 ~14 d可见菌落生长,菌落为灰白色,光照后菌落变为深黄色。人类接触污染的海水或海洋生物而感染,本菌可引起游泳池肉芽肿。在组织内,该菌由短粗的、染色均匀的杆菌聚集成丛,或由细长的、串珠状和条纹状的杆菌分散于整个组织,在痰中通常不会被发现。

12.蟾分枝杆菌 此菌首次从一只非洲瓜蟾(Xenopus Laevis)的皮肤病灶中分离出来,1959年施瓦巴彻(Schwabacher)对该菌进行了描述。该菌为缓慢生长菌,最适生长温度是42℃,培养3 ~4周,形成细小、扁平、光滑型菌落,有时略有色素产生,继续培养常产生黄色色素。本菌为长杆状或长丝状。热水贮存系统中可检出,可引起医院内感染,肺部是最常见的感染部位。

13.溃疡分枝杆菌 此菌是在热带患者皮肤溃疡处缓慢生长的非色素菌,最初在热带发现,可引起坏死性的皮肤疾病,如不及早治疗,即形成中心坏死的慢性溃疡。该菌长1.5 ~3.0 μm,宽0.5 μm,在组织切片中,一般较大并呈串株状。该菌最适宜生长温度为33℃,生长非常缓慢,于30 ~33℃持续温育6 ~12周可出现菌落,菌落光滑、细小而隆起,呈淡乳脂色至黄色,在37℃不生长。从痰中不能分离到溃疡分枝杆菌。

14.猿分枝杆菌 1965年有专家首次报告了猿分枝杆菌。该菌的某些生物化学性状和培养特性,包括其产生烟酸的能力使之与其他光产色菌区别开来。该菌菌落细小,生长不良,曝光后黄色色素产生很缓慢,除非做烟酸试验和色素产生试验,否则可能与胞内分枝杆菌混淆。该菌抗多数常用的抗结核药物,因此应做吡嗪酰胺、环丝氨酸、卷曲霉素、卡那霉素、四环素及红霉素的药敏试验。

15.瘰疬分枝杆菌 1956年,Prissiek和Masson首次确证瘰疬分枝杆菌是儿童淋巴腺炎一种类型的病原体。该菌比人型分枝杆菌长、粗并呈更粗的串珠状,菌落坚硬,隆起,产生黄橙色色素。(https://www.daowen.com)

16.苏尔加分枝杆菌 1972年苏尔加分枝杆菌被首次鉴定为致病菌。在室温培养时,该菌呈现光产色性,而在37℃培养时呈现暗产色性。苏尔加分枝杆菌分布广泛,在威尔士、日本和美国均有病例报告。该菌必须与戈登分枝杆菌鉴别开来。戈登分枝杆菌是一种常从未被结核菌感染患者痰中分离出的慢生长暗产色菌,吐温—80水解试验可以鉴别这两种菌:戈登分枝杆菌呈阳性反应,而苏尔加分枝杆菌一般呈阴性反应。尿素酶试验和硝酸还原试验也有助于鉴别。

(刘一力 卢洪洲)

参考文献

1.倪语星,尚红.临床微生物学与检验[M].北京:人民卫生出版社,2011.

2.中国防痨协会基础专业委员会.结核病诊断实验室检验规程[M].北京:中国教育文化出版社,2006.

3.严碧涯,端木宏谨.结核病学[M].北京:北京出版社,2003.

4.熊礼宽.结核病实验室诊断[M].北京:人民卫生出版社,2003.

5.綦迎成,李君莲,陈美娟.实用结核病实验室诊断[M].北京:人民军医出版社,2012.

6.李中兴.非结核分枝杆菌与临床感染[M].北京:科学出版社,2015.

7.Chadwick MV.分枝杆菌[M].李国利,庄玉辉,译.北京:人民军医出版社,1985.

8.王金良,倪语星,徐英春,等.分枝杆菌病实验诊断规范[M].上海:上海科学技术出版社,2006.

9.刘同伦,实用结核病学[M].沈阳:辽宁科学技术出版社,1987.

10.Peyffer GE.Mycobacterium: General Characteristics, Laboratory Detection, and Staining Procedures[M]//Jorgensen JH, Pfaller MA, Carroll KC, et al.Manual of clinical microbiology.11th ed.USA: ASM press, 2015: 552—553.

11.何文英,黄新玲,郑丽英.结核病感染预防与控制[M].武汉:华中科技大学出版社,2018.