二、样本处理方法
重要提示：所有操作应严格遵守结核分枝杆菌实验室生物安全相关规定。
（一） VITEK MS分枝杆菌/诺卡菌试剂盒—Ref 415659
1.该试剂盒成分
（1） R1=乙醇（ready to use，70%）（2×25 ml）。
（2） R2=甲酸（ready to use，70%）（4×0.5 ml）。
（3） R3=乙腈（ready to use，100%）（4×0.5 ml）。
（4） RBT=2 ml圆底无色离心管（2×50 units）。
（5） BEAD=含玻璃珠管（2×50 units）。
2.试剂盒未提供但需要的试验材料
（1） 微量离心机：10 000 ～14 000 g。
（2） GENIE 2 Vortex + Mobio adaptor（ref 270677）或珠磨器（Bead beater）。
（3） 生物安全柜。
（4） 微量加样器及加样头。
（5） 涡旋振荡器。
（6） 1 μl接种环（取分枝杆菌用）。
（7） 细胞刷（取嵌入琼脂的诺卡菌用）。
（二） VITEK MS分枝杆菌液体培养基处理试剂盒（Vitek Ms Liquid Mycobacterium Supplemental Kit）—Ref 421564
该试剂盒包括5 ml离心管（2×50 units）和背面安全防护吸水纸（1×250 units）。
（三） 固体培养基分枝杆菌/诺卡菌准备流程
1.对于每种受试微生物，将0.5 ml的R1移入含玻璃珠的试管（BEAD）。
2.对于Mycobacterium，使用1 μl接种环取受试菌并移入试管，然后盖紧。对于NOCARDIA，使用1 μl接种环（一整环）或弯曲型细胞刷（菌株内嵌时用）轻轻从培养基取菌并移入试管，然后盖紧。
3.使用带适配器的涡旋振荡器（最大速度）分散细胞15 min，或使用研磨珠均质器分散细菌5 min。
4.从振荡器或研磨珠均质器上取下试管，并置于室温孵育10 min以完成灭活。
5.使用涡旋振荡器振荡5 ～12 s，并立即使用移液器将悬浮液移入空的2 ml圆底试管（RBT）。注意不要移取任何玻璃珠，丢弃吸管头。
6.以10 000 ～14 000 g的速度离心处理标本2 min，以形成沉淀物。(https://www.daowen.com)
7.使用移液管吸除所有R1上清液。
8.向菌团添加10 μl的R2。使用移液器吹打直到菌团均匀散开或直接通过涡旋振荡器重新悬浮。
9.添加10 μl的R3，并使用涡旋振荡器振荡。
10.以10 000至14 000 g的速度离心处理2 min，以形成沉淀物。
11.对于每种受试微生物，立即将1 μl上清液移到靶板点位上。
12.让每个点位完全晾干。
13.向每个靶板点位添加1 μl的VITEK MS—CHCA基质，每次添加基质都使用新的移液吸管头。让基质完全风干。
（四） 液体培养基分枝杆菌准备流程
注释：在测试仪器鉴定为阳性后的24 ～72 h内，测试阳性BacT/AlERT MP瓶、BACTEC MGIT 960试管（BD）或Versa TREK Myco培养基瓶（Thermo Fisher）。如果瓶子或试管从仪器中取出进行其他测试，继续在培养箱中以35 ～37℃培育直至其在阳性后培育24 ～72 h。
1.使用涡旋振荡器混合瓶子或试管5～10 s，然后立即以无菌方式将3.0 ml培养基从培养瓶移入5 ml CBT。
2.使用带15 ml适配器的吊桶式离心机以3 000 g的速度离心处理标本10 min，以形成沉淀物。
3.将培养基移入废物容器，并在带保护性背板的吸水垫上完全吸干（WIPE）。使用后丢弃垫子，避免接触吸收表面。
4.将500 μl的R1加入5 ml CBT，然后使用移液管轻轻上下混合以重新悬浮颗粒。
5.移入装有玻璃珠（BEAD）的试管中。
6.使用带适配器的涡旋振荡器（最大速度）分散细菌15 min，或使用研磨珠均质器分散细菌5 min。
7.从振荡器或研磨珠均质器上取下试管，并置于室温孵育10 min以完成灭活。
8.使用涡旋振荡器振荡5 ～12 s，并立即使用移液器将悬浮液移入空的2 ml圆底试管（RBT）。注意不要移取任何玻璃珠，丢弃吸管头。
9.以最低14 000 g的速度离心处理标本2 min，以形成沉淀物。
10.使用移液管吸除所有R1上清液。
11.向菌团添加10 μl的R2。使用移液器吹打直到菌团均匀散开或直接通过涡旋振荡器重新悬浮。如果沉淀物不可见，用R2清洗试管两侧，以确保重新悬浮。
12.添加10 μl的R3，并使用涡旋振荡器振荡。
13.以最低14 000 g的速度离心处理2 min。
14.对于每种受试微生物，立即将1 μl上清液移到靶板点位上。
15.让每个点位完全晾干。注意：如果在添加VITEK MS—CHCA前点位未完全晾干，样品最优结晶化可能无法实现，并会潜在干扰VITEK MS结果（无鉴定）。
16.向每个靶板点位添加1 μl的VITEK MS—CHCA基质，每次添加基质都使用新的移液吸管头，让基质完全风干。