结核分枝杆菌和牛分枝杆菌鉴定
结核分枝杆菌复合群常见者为结核分枝杆菌和牛分枝杆菌。结核分枝杆菌是肺结核主要病原菌，大约占85%。两者鉴定试验以nitrate还原试验、niacin试验、pyrazinamidase活性试验、TCH生长抑制试验为主。在这四种试验中，结核分枝杆菌均为阳性反应，反之为牛分枝杆菌。
（一） 结核分枝杆菌
1.罗氏培养基上菌落形态呈结节状或颗粒状，中央凸起，边缘薄且不规则，粗糙、淡黄色。纯化后菌体接种于Middlebrook 7H10培养基5 ～10 d后，在低倍显微镜下观察是鸟巢式、绳索状的菌落，但25 d后则为粗糙、淡黄色菌落。
2.抗酸染色 菌体细小、微微弯曲、强抗酸性、带有明显的串珠状菌体。
3.生化特性 ① 硝酸盐还原试验（+）；② 烟酸合成试验（+）；③ TCH生长（+）；④ 吡嗪酰胺酶试验（+）；⑤ NAP生长（—）。
（二） 牛分枝杆菌
1.罗氏培养6 ～8周后，才可见到菌落生长，呈淡黄、扁平、小型菌落，为粗糙型或光滑型。在Middlebrook 7H10培养基上生长不良，很细小，似小水滴样。
2.抗酸染色 菌体比结核分枝杆菌细长，较少弯曲，较少串珠状菌体。
3.生化特性 ① 硝酸盐还原试验（－）；② 烟酸合成试验（－）；③ TCH生长（－）；④ 吡嗪酰胺酶试验（－）。
（三） TCH（噻吩—2—羧酸肼）生长抑制试验(https://www.daowen.com)
1.试验原理 本试验适用于鉴别牛分枝杆菌、结核分枝杆菌及其他缓慢生长非产色分枝杆菌。结核分枝杆菌和其他生长缓慢的分枝杆菌对TCH的抗药性浓度为1 ～5 μg/ml。牛分枝杆菌对低浓度TCH敏感，但对异烟肼耐药的牛分枝杆菌也可能对TCH具有抗药性。
2.试验方法 配制TCH （噻吩—2—羧酸肼）培养基：TCH 5 mg溶于10 ml灭菌蒸馏水中，取1 ml加入100 ml培养基中，终浓度为5 μg/ml，制备方法同药物敏感试验培养基制法。
3.接种方法 与药物敏感试验相同，10—2 mg/ml菌液，接种0.1 ml，37℃孵育，每周观察一次，与药物敏感试验同步进行。
4.结果判读 快速生长非结核分枝杆菌l周内可生长菌落，慢生长菌4周报告结果。结核分枝杆菌TCH培养基上生长，牛分枝杆菌不生长。
5.TCH局限性分析
（1） 世界卫生组织仅推荐应用PNB耐受试验鉴别MTB复合群和非结核分枝杆菌，不推荐使用TCH进行牛分枝杆菌鉴定。
（2） 很多来源于亚洲的结核分枝杆菌（MTB）菌株对TCH敏感，这些亚洲变异株的TCH试验结果与经典MTB菌株截然不同，此类MTB菌株需应用烟酸试验、硝酸盐还原试验和吡嗪酰胺酶试验进行鉴别。
（3） 鉴于我国目前结核病细菌学检验规程中规定TCH培养基中TCH浓度（5 mg/L，罗氏培养基）高于美国疾病预防控制中心分枝杆菌实验室指南中建议的TCH浓度（2 mg/L，7H10琼脂培养基） ，已有研究表明，降低TCH浓度可减少错误鉴定的概率。分枝杆菌属菌种初步鉴定见表7—1—2—1。若需进一步进行菌种鉴定，可进行基因测序或基因杂交。
表7—1—2—1 分枝杆菌菌种初步鉴定
