NTM药敏试验方法
NTM药物敏感性试验（drug susceptibility testing，DST）起初不用于临床。20世纪50年代初，NTM的DST仅用于鉴别结核杆菌复合群与非结核分枝杆菌。由于当时认为NTM没有明显的致病性，分离的NTM的DST结果意义不大。直到1953年，Buhler和Pollack的研究发现2例由“黄杆菌”（现在称为M.kansasii）引起的肺部感染，NTM的DST试验才得到临床的重视。
以往的研究发现，NTM的体外药敏试验结果与患者临床疗效存在差异，推测可能有以下原因。① 缺乏标准化的DST方法，试验结果缺乏临床评估。② 体内药物存在相互作用。③ 体外药敏结果与体内细菌对药物反应间的联系，缺乏科学有效的评估。NTM药敏试验的重要性仍然存在争议。然而，随着NTM病临床重要性的增加，临床对NTM开展DST的需求不断增加。NTM药敏试验建立的最初，都从参照结核分枝杆菌的药敏试验方法开始。
1.罗氏培养基固体药敏试验 以罗氏培养基为基础的固体药敏试验是最常用的结核分枝杆菌的药敏试验方法。在没有公认的NTM 的药敏试验方法之前，最初的尝试是通过将非结核分枝杆菌按照结核分枝杆菌的方法进行药敏试验。由于不同种的分枝杆菌对药物的反应性存在很大的差异，因此这种完全照搬的模式缺乏理论依据，其可靠性和对临床用药的指导意义一直被诟病。依据细菌的特点推测，以罗氏培养基为基础的固体药敏试验可能对SGM 的指导价值要高于对RGM 的指导价值，然而针对不同的菌种，这种可靠性尚缺乏系统的评估。由于已有的罗氏培养基药敏试验主要针对的是抗结核药物，因此对于有些抗结核药物可以作为有效药物的菌种，比如堪萨斯分枝杆菌，可能更有实际的应用价值。
2.琼脂扩散法/纸片法（用于细菌培养的固体培养基＋加药的纸片） 先用琼脂扩散法测定各种抗生素的抑菌环，然后以两抗生素抑菌环半径之和为间距（无抑菌环者为0），放置纸片。35℃培养3 d后观察，以抑菌环交界处弧形扩宽为相加作用，弧形变平为拮抗作用，无变化为无关作用。琼脂扩散法/纸片法是普通细菌常用的一种药敏试验方法，RGM比较适用，SGM和海分枝杆菌准确性较低。(https://www.daowen.com)
3.液体培养管药物稀释法 基于液体培养基的比例法间接药敏试验，在液体培养基中加入一定浓度药物、一定数量的分枝杆菌，然后通过全自动化分枝杆菌培养系统，通过仪器检测分枝杆菌生长过程，自动报告检测结果：当分枝杆菌能在抑制其生长的最低药物浓度下生长时被界定为耐药菌株，反之则定为敏感菌株。液体药敏试验通过液体培养基与全自动的细菌培养系统的结合，成为一种重要的结核分枝杆菌药敏试验方法，在全球范围内得到应用。在非结核分枝杆菌领域，理论上说也可以应用，但目前主要的问题是缺乏不同NTM菌种对不同药物的公认关键浓度。已经有比较多的报道应用MGIT960系统开展NTM的药物敏感性测试，在数据逐渐丰富的基础上未来能够获得不同NTM菌种对不同药物的最佳药敏试验临界浓度。
4.微孔板稀释法 微量肉汤稀释法，采用二倍稀释法将药物从高浓度向低浓度稀释，在孔中加入一定浓度的菌悬液，设立不加药物对照孔和不加药物与菌液的空白对照孔，置30℃内孵育，3 ～5 d观察结果并与对照孔作对比，当对照孔生长菌量数为“1+”以上时读取最低浓度肉眼未见细菌生长的孔，这个孔的药敏浓度即定义为MIC。微孔板稀释法使用最为广泛，适用于RGM和SGM，与固体培养基法相比，获得的MICs较低，细菌生长状态对MICs影响很大。目前CLSI推荐鸟—胞内分枝杆菌复合群、堪萨斯分枝杆菌、海分枝杆菌、RGM使用微孔板稀释法进行药物敏感性分析。
5.E-test药敏法 此法也是一种培养法，是将含不同浓度梯度抗结核药物的试条置于含有MTB的琼脂培养基上，药物能迅速在琼脂中扩散，培养5 ～10 d后可在敏感药条周围形成一个椭圆形的抑菌圈。直径150 mm的平板可同时放置5个试条进行5种药物的敏感性试验。如果在高于各种抗结核药物MIC下仍然生长，被视为耐药，可在一周左右获得试验结果。该法快速、稳定、重复性好，但与比例法对照，存在假阳性和假阴性，而且E-test试条价格昂贵，很难常规使用。在非结核分枝杆菌药敏试验领域，E-test的尝试还非常少。
6.NTM耐药的分子诊断 NTM和结核分枝杆菌有相同或类似的药物靶位，但NTM对很多抗结核药物天然耐药，表明NTM细胞壁通透性、药物外排泵、药物与靶位的低亲和力等其他因素较基因多态性在NTM耐药中发挥着更为重要的作用。随着研究的深入，发现某些特定菌种对某些药物耐药的机制与特定的耐药基因有关，如MAC耐大环内酯类药物与23S核糖体RNA基因（rrl）的基因突变高度相关；16S核糖体RNA基因（rrs）突变与脓肿分枝杆菌、龟分枝杆菌对阿米卡星耐药相关；rpoB基因突变与堪萨斯分枝杆菌对利福平耐药相关。有限的研究结果提示一些已知基因的单核苷酸多态性可能与耐药有关，但现有的数据仅报道了个别药物中较低比例的耐药菌株可能与某一基因的序列多态性有关，因此未来耐药分子机制方面亟待更深入的研究，才有助于未来应用分子手段尽快发现耐药菌株。