结核分枝杆菌与非结核分枝杆菌的区别
（一） 生长速度
生长速度是指在固体培养基上而不是在液体培养基中的生长速度，即在固体培养基上形成成熟的菌落，不需使用放大镜，用肉眼即可辨识所需要的时间。7 d以内生长者，称快速生长菌；超过7 d者，称缓慢生长菌。但是由于初次分离时需经过消化去污染处理，有些快速生长菌群需3周以上方能在培养基上观察到菌落，所以进行生长速度鉴定时，应以培养基上的菌落适当稀释，接种于固体培养基做传代培养，才能得到正确客观的评估。菌株传代培养时，如果结核分枝杆菌菌悬液配制很浓时，接种固体培养基，有的结核分枝杆菌也会出现7 d内生长。一般情况下，标本初次固体培养，7 d以内生长者为非结核分枝杆菌；菌株传代培养，严格按照如下操作，进行判定。
1.生长速度试验操作步骤
（1） 将怀疑菌落挑出，以无菌蒸馏水配成1个麦氏单位菌悬液。
（2） 分别接种0.1 ml菌落至2支L—J培养基。
（3） 在35℃的CO2培养箱中培养。若怀疑为溃疡分枝杆菌、海分枝杆菌或嗜血分枝杆菌，则培养温度为30℃。
（4） 通常在接种后3 d、5 d、6 d观察，随后每周检查，直至菌落发育完全。
2.判读
快速生长非结核分枝杆菌：在7 d内完全发育。
缓慢生长菌：在7 d后完全发育。
注意事项：生长速度与温度关系通常由培养在37℃及30℃环境中判断，若必要，则培养在24℃、30℃、37℃及42℃环境中。
（二） 色素产生
有些分枝杆菌在没有光线下会产生色素，有些分枝杆菌则需在光线照射下产生色素，有些分枝杆菌无论是否有光均不产生色素。分枝杆菌色素形成的特性不同，如上所述，可分为暗产色、光产色和非产色三大类。结核分枝杆菌复合群属于非产色菌。因此，标本在分枝杆菌培养过程中，有黄色或橘黄色色素产生，经抗酸染色证实为阳性，可初步报告为非结核分枝杆菌。
1.光产色和暗产色非结核分枝杆菌的鉴定
将双管接种标本的培养基于培养箱暗处培养，观察有黄色或橙色菌落生长，抗酸染色阳性，即可判为暗产色非结核分枝杆菌。培养基出现无色或淡黄色菌落生长时，抗酸染色证实，将其中1支生长有菌落的培养管平放在60 W灯泡（距离60 cm）下照射至少1 h，再将该培养基放回培养箱，继续培养12 ～24 h后，以未曝光的培养基为对照，产生黄色或橘黄色色素为光产色非结核分枝杆菌。
（1） 罗氏培养基上产生绿色：偶发分枝杆菌。(https://www.daowen.com)
（2） 堪萨斯分枝杆菌和海分枝杆菌于暗处培养呈灰白色，转移到光线下培养24 h后，菌落呈柠檬黄色。堪萨斯分枝杆菌能产生橙色结晶。
（3） 有些鸟—胞内分枝杆菌菌株，小菌落时无色素，而较老及较大菌落呈黄色，并非由光线诱导产生。
（4） 有些分枝杆菌在不同温度生长时会有不同的产色性。例如苏尔加分枝杆菌在37℃为暗产色性，在25℃下呈光产色性。
（三） 菌落形态
可用放大镜或显微镜观察单个菌落的形态。临床分离培养常见快速生长非结核分枝杆菌菌落。常为乳白色或米黄色、光滑、湿润菌落。慢生长非结核分枝杆菌一般为：黄色、橘黄色或无色，菌落光滑湿润。结核分枝杆菌常为淡黄色、粗糙、中央凸起菌落。在米氏7H10或含3%甘油的琼脂等半透明培养基上最易观察菌落特征。
（四） 28℃生长试验
结核分枝杆菌复合群在28℃培养条件下不生长，而NTM菌群的大部分分枝杆菌可以生长。
试验方法：2支罗氏培养基，每支培养基接种10—3 mg细菌。1支置于28℃孵育，1支置于37℃孵育。每周观察1次结果，同时记录罗氏培养基上菌落生长情况直至孵育4周。快速生长的非结核分枝杆菌1周左右可见菌落，缓慢生长的分枝杆菌4周报告结果。结核分枝杆菌复合群在28℃不生长。
阳性对照菌株：堪萨斯分枝杆菌（M.kansasii）。
阴性对照菌株：H37Rv。
（五） PNB生化鉴定
PNB（对硝基苯甲酸）培养基，是将PNB用二甲基甲酰胺或丙二醇溶解稀释后加入未加热的中性罗氏培养基中，使最终浓度为0.5 mg/ml，制备方法同药物敏感试验培养基制法。其局限性有以下三点。
（1） 耗时较长，通常需要2 ～4周，步骤也较为复杂，且由于受含药培养基、实验室室内质量控制等多种因素影响，该试验结果不稳定。
（2） 有些NTM株对该试验不敏感，大约8%的NTM株受到PNB抑制而被误判为结核分枝杆菌株，并且有3%～5%的结核分枝杆菌株对PNB产生了耐受性。
（3） 在应用PCR—反向核酸探针杂交和PCR—DNA测序对分枝杆菌菌种鉴定研究工作中发现，某些NTM菌株PNB生长试验（－），而以往对此没有充分的认识，有可能使其错误地被归类为MTC而放弃进一步的菌种鉴定，应当引起重视。