三、直接涂片法
该方法快速，操作简便、价格低廉，数小时可报告结果，适于各级实验室开展，是直接发现病原菌的检查方法、目前发现和确定传染源的主要途径、考核和评价疗效的重要指标，有重要的流行病学意义。适用标本类型为呼吸道标本、粪便、脓液标本。尿液、脑脊液和胸腹水标本需要NaOH处理后涂片或蒸馏水稀释或生理盐水稀释后涂片。
直接涂片方法易受人为因素影响，不同检验人员之间可能会出现较大误差，需要经过标准化培训，缩小差异，减少漏检。且敏感性低，通常每毫升含5 000 ～10 000条以上抗酸杆菌才可得到阳性结果，阳性率低于漂浮集菌法和离心沉淀法。直接涂片时，痰标本不易黏附在玻片上，最好是在生物安全柜中烤片机上加热玻片后再挑取标本进行涂片，或者将痰标本先高压灭菌，再进行涂片。涂片方式挑取脓痰、血痰或黏稠部分，以同心圆画圈的形式，涂成椭圆形10 mm×20 mm大小、厚薄适度的痰膜，这样菌体分布比较均匀，镜检时不易漏检。涂片过厚时，染色时涂膜易脱落，抗酸染色时，厚重的蓝色掩盖红色的抗酸杆菌；荧光染色时，背景浅黄色，黄绿色的荧光不易观察，易漏检。
注意事项：黏液脓性痰常含有无数微小的白色或灰白色的小颗粒，其大小有所不同，可从非常小到具有1 mm直径那么大。这些小颗粒没有痰中黏液那样黏稠，涂在玻片上好像是颗粒状浆糊样。它们很像食物颗粒，必须加以鉴别。这些小颗粒是由小的脓细胞堆或坏死肺组织的碎块所组成，它可能含有的结核分枝杆菌数量比黏液成分多的痰多，所以要将痰中这些小颗粒选做涂片用。
（一） 呼吸道标本
1.脓痰 用折断的竹签茬端挑取痰标本的脓样、干酪样部分约50 μl，于玻片正面的右侧2/3中央处以同心圆划圈的方式，均匀抹成10 mm×20 mm椭圆、厚薄适度的涂片，置于烤片机上烘干，备染色用。
2.干酪痰 用折断的竹签茬端挑取痰标本的脓样、干酪样部分约50 μl，于玻片正面的右侧2/3中央处以同心圆划圈的方式，均匀抹成10 mm×20 mm椭圆、厚薄适度的涂片，置于烤片机上烘干，备染色用。
3.黏液痰 用折断的竹签茬端挑取黏液，将标本在标本管壁上稍微研磨后，取标本约50 μl，涂在玻片上，另取一支新竹签于玻片正面的右侧2/3中央处以同心圆划圈的方式，均匀抹成10 mm×20 mm椭圆状、厚薄适度的涂片，置于烤片机上烘干，备染色用。
4.混合痰 用一次性吸管将口水吸出弃去，用竹签将黏液拉出，涂片方法同“黏液痰”。
5.口水痰 用一次性吸管吸取标本，滴在玻片正面的右侧2/3中央处，以同心圆划圈的方式，均匀抹成10 mm×20 mm椭圆、厚薄适度的涂片，置于烤片机上烘干，备染色用。
6.血痰 涂片方法同黏液痰，对于严重的血性痰液，推荐NaOH消化后，PBS中和或蒸馏水稀释，离心沉淀后涂片。若不处理就直接涂片，褐色的血红素会干扰镜检，造成漏检。(https://www.daowen.com)
（二） 脓液
脓液直接涂片法阳性率为46%，浓缩法涂片阳性率为80%～96%。
方法1：用折断的竹签茬端挑取脓液约绿豆大小，于玻片正面的右侧2/3中央处以同心圆划圈的方式，均匀涂抹成10 mm×20 mm椭圆、厚薄适度的涂片，置于烤片机上烘干，备染色用。
注意事项：涂片太厚时，染色时涂膜易脱落，涂片宜薄不宜厚。
方法2：用一次性无菌吸管取脓液一滴或用竹签取绿豆大小脓液，于玻片右端，另取一张玻片十字交叉盖在脓液上，两张玻片压紧，轻轻拉开，置于烤片机上烘干，备染色用。该方法涂片，可以避免或减少染色冲洗时涂膜脱落，见图5—1—3—1。
（三） 粪便标本
用折断的竹签茬端挑取粪便标本的脓样、黏液样部分约50 μl，于玻片正面的右侧2/3中央处以同心圆划圈的方式，均匀涂抹成10 mm×20 mm椭圆、厚薄适度的涂片，置于烤片机上烘干，备染色用。切记涂片宜薄不宜厚。
图5—1—3—1 脓液推片、涂片差别