萋—尼抗酸染色

一、萋—尼抗酸染色

（一） 原理

抗酸杆菌细胞壁中分枝菌酸在苯酚的渗透性助染作用下，与首染染料中复红结合牢固，能够耐受酸性乙醇的脱色，显微镜观察时保持红色；与之相反，非抗酸杆菌和绝大多数人体细胞由于细胞结构和菌体成分的限制，在首染染料染色后，容易被酸性乙醇脱色，经复染后被亚甲蓝染为蓝色，以此区分。

（二） 染色液配制

1.石炭酸复红染液　碱性复红0.3 g，95%乙醇10.0 ml，石炭酸（已溶） 5.0 ml，蒸馏水95.0 ml。

2.脱色剂　35%浓盐酸3 ml，95%乙醇97 ml。

3.复染液　亚甲蓝0.3 g，蒸馏水100 ml。

注意事项：碱性复红乙醇储存液应避光保存，为保证染液的质量，建议储存液保存不超过6个月。石炭酸（苯酚，phenol，分子式为C6H6O）：应使用熔点为40.5℃的分析纯试剂。

（三） 染色操作步骤（图5—2—1—1）

1.涂片自然干燥后，放置在染色架上，玻片间距保持1 cm以上的距离，玻片两端顶部悬空；(https://www.daowen.com)

图5—2—1—1　染色操作步骤

2.滴加石炭酸复红染液，盖满涂膜，用酒精灯火焰在玻片下方来回加热至出现蒸汽后，撤离火焰，染色5 min；

3.流水自玻片上端轻缓来回冲洗，冲去染色液，沥去标本上剩余水分；

4.滴加盐酸乙醇布满玻片，脱色2 min；如有必要，需流水洗去脱色液后，再次脱色至无可视红色为止；

5.流水自玻片一端轻缓冲洗，冲去脱色液，沥去玻片上剩余水分；

6.滴加亚甲蓝复染液，染色2 min；

7.流水自玻片一端轻缓冲洗，冲去复染液，然后沥去标本上剩余水分，待玻片干燥后镜检。