中性罗氏培养基
中性罗氏固体培养基为分枝杆菌分离培养、菌株传代的基础培养基。用于离心中和法培养、菌株传代及药物敏感性试验。培养基含有丰富的营养，能满足分枝杆菌生长所需的碳源和氮源；磷酸盐为缓冲剂，能维持培养基的pH；孔雀石绿抑制杂菌的生长。
1.培养基的制备
（1） 基础液：见表13—1—1—1。
（2） 孔雀石绿溶液：孔雀石绿染料2.0 g，无菌蒸馏水100 ml。37℃温箱放置1 ～2 h助溶。孔雀石绿液不能长期保存，如出现沉淀或颜色变浅，都应废弃并制备新鲜溶液。
表13—1—1—1 中性罗氏培养基基础液组成
注：3.6 g天门冬素可用谷氨酸钠（纯度≥99%）7.2 g代替，加热溶解，121℃ 20 min灭菌，备用。
（3） 全卵液的匀化：将新鲜鸡蛋用洗洁精刷洗干净后于75%乙醇中浸泡30 min，晾干后使用。以无菌操作方式制备匀化全卵液，并用双层以上无菌纱布过滤去除不能匀化的膜状物。
（4） 培养基的配制：在无菌条件下将下列成分倒入一个大的无菌烧瓶中充分混匀：基础液600 ml，孔雀石绿溶液20 ml，匀质全卵液1 000 ml。充分混匀后的培养基溶液静置30 ～60 min，然后分装在无菌螺旋盖培养瓶内，注意拧紧盖子。每支量约8 ml以培养基斜面高度占试管的2/3，且底部充满培养基为佳。培养基分装结束后要尽快（15 min内）开始凝固过程，以防沉淀发生。
（5） 培养基凝固：培养基放入凝固器之前，先将凝固器温度升至85℃，培养基放入后待温度达到85℃时开始计算时间，凝固50 min后及时将培养基从凝固器中取出或以电动风机将其冷却。凝固好的培养基斜面呈鲜艳的黄绿色，表面光滑无泡，具有一定的韧性和酸碱缓冲能力。
（6） 培养基的保存：质量合格的培养基，注明日期后分装于防潮包装内，4℃保存。保存期不能超过4周。培养基保存前应检查瓶盖有无封闭，防止培养基干化和冰箱凝结水的渗水造成污染。
2.培养基制备的注意事项(https://www.daowen.com)
（1） 在培养基制备间内进行，制备培养基时应有相应原始记录。
（2） 培养基制备前应对培养基制备间进行消毒。
（3） 制备培养基的所有物品均应高压灭菌。
（4） 85℃加热是使培养基固化，而不是灭菌，所以整个操作应在无菌条件下进行。
（5） 培养基凝固时，温度过高或时间过长都会降低培养基的质量，培养基褪色可能是因为温度过高。培养基表面出现气泡说明凝固有差错。
（6） 凝固时最好采用蒸汽凝固器，此时培养基受热均匀。
3.储存条件 2 ～8℃冰箱。
4.有效期 1个月内使用，确保培养基质量。
5.质量控制
（1） 冷却后的整批培养基或抽取一部分，置于37℃孵育24 h进行无菌试验。对质量不合格的培养基，如出现气泡、干涸、量不足及发生污染等，必须废弃。
（2） 每批培养基应抽取部分接种质控菌株（H37RV标准株ATCC）10—3 mg，观察生长情况。