五、质量控制
(一) 保证安全
固定经过培训的实验员进行药物敏感性试验。为保证试验质量和实验室人员安全,药物敏感性试验每人不超过20株/d。
(二) 固体药敏试验的质量控制
1.对照培养基和含药培养基的质量控制 ① 对照培养基敏感性测试:参考结核分枝杆菌培养相关内容。② 含药培养基敏感性测试:每批培养基应使用标准敏感菌株(H37RV)作为敏感对照,以检测含药培养基质量。
2.每批试验以结核分枝杆菌标准参考菌株(H37Rv敏感株)10—3 mg/ml检测含药培养基的质量,H37Rv敏感株对所有的一线或二线抗生素药物全部敏感,结核分枝杆菌质控菌株可以用7H9肉汤制备成菌悬液,与标准麦氏比浊管(McFarland No.1)比浊,配成1 mg/ml的菌悬液分装,可以贮存于—70℃低温冰箱至少6个月。
3.培养箱的温度 培养箱内的实际温度应保持在(36±1)℃,将温度计放在不同的易观察的地方,以确保温度的均一性,使用水银温度计进行测量,每日记录。若高稀释度菌液(10—4 mg/ml)在对照培养基上生长的菌落数少于20个菌落,则应该从对照管传代培养,重复试验。
(三) 液体药敏试验的质量控制
1.质控频度 每新进一批MGIT培养管都需做1次质控。(https://www.daowen.com)
2.质控菌株 结核分枝杆菌ATCC27294,H37Rv。
(1) 从固体培养基中取出菌龄不超过14 d的ATCC菌株,制备Middlebrook 7H9肉汤悬液。
(2) 使悬液静置20 min,将上清液转移到空的无菌试管中,并静置15 min。
(3) 将上清液转移到另外一个空的无菌试管中。
(4) 使用比浊仪,将悬液的浊度调节到大约0.5 McFarland标准。
(5) 接种SIRE试剂盒孵育检测4 ~13 d,接种PZA试剂盒孵育检测4 ~20 d观察检测结果是否正确。
(6) 如果结果不正确,重复检测一次。如果还不正确,请直接与相关公司的技术服务人员联系。
(7) 建议在进行药物敏感性试验时,每月都要用相同株的质控菌株进行质量控制试验。如果质控实验失败,则患者的药敏检测结果不应报告。重复检测,找到质控试验失败的原因。