四、液体药敏试验
(一) 试剂
1.无菌生理盐水。
2.BBL MGIT 7 ml Tube。
3.BACTEC MGIT SIRE药物 链霉素(Streptomycin)332 μg,异烟肼(Isoniazid)33.2 μg,利福平(Rifampin)332 μg,乙胺丁醇(Ethambutol)1660 μg。
4.BACTEC MGIT SIRE添加剂 含牛血清蛋白(Bovine albumin)50.0 g、触媒(Catalase)0.03 g、葡萄糖(Dextrose)20.0 g、油酸(Oleic Acid)0.6 g。
5.试剂保存 ① BACTEC MGIT SIRE药物,2 ~8℃保存,溶解后可在—20℃下保存6个月(或更低的温度下可保存超过6个月,但不能超过有效期),解冻后应立即使用,未用完的部分应予丢弃。② BACTEC MGIT SIRE添加剂,2 ~8℃避光保存,请勿冷冻或过热。
6.使用 ① BACTEC MGIT SIRE药物,用4 ml无菌蒸馏水/去离子水溶解。② BBL MGIT 7 ml Tube,可直接使用。
(二) 器材
1.一次性50 ml离心管(含玻璃珠和不含玻璃珠)。
2.一次性枪头(1 000 μl和200 μl)。
3.BACTEC MGIT 960 System。(https://www.daowen.com)
(三) 接种和培养
1.接种物准备
(1) 液体培养阳性物:取1 ~2 d阳性培养物2.5 ml于含玻璃珠的离心管中涡旋振荡15 ~32 s。
(2) 固体培养阳性物:制成0.5 mg/ml的菌悬液,1 ∶5生理盐水稀释。
2.接种
(1) 取5支BBL MGIT 7 ml Tube,每管加入800 μl BBL MGIT。
(2) 第一管为对照管,第二至五管依次为S、I、R、E,第二至五管依次加入100 μl对应的药物。
(3) 对照管加入1 ∶100稀释的菌悬液(5 ml生理盐水中加入50 μl接种物)500 μl。
(4) 第二至五管加入500 μl接种物。
3.培养 放入BACTEC MGIT 960 System中,具体操作参见前文第六章第五节(本书第90 ~92页)。
4.结果判断 仪器自动判读,对报错的药敏结果应重新试验。