一、固体药敏试验

虽然世界卫生组织在全球范围内推荐使用液体药敏试验和分子药敏试验，但使用固体培养基的传统表型药敏试验仍然更为普遍。以鸡卵为基础的罗氏培养基和以琼脂为基础的7H10培养基都是全球范围内广泛应用的固体培养基，而罗氏培养基基本上是我国固体药敏试验应用的唯一类型的培养基，琼脂培养基仅限于科学研究应用。固体药敏试验方法费用低廉且可检测多种药物敏感性，但其缺陷也非常明显，除了操作复杂外，还耗时长，通常需要4 ～6周时间才能获得药敏结果。

由于罗氏培养基制备简单，价格便宜，并且能够用于分枝杆菌初次分离培养、传代培养、菌落观察、保存菌种、药物敏感性测定及初步菌种鉴定等，因此是目前使用最为广泛的一种培养基。依据细菌在含有特定浓度药物的培养基上结核菌的生长状态，与不含药的培养基上细菌的生长状态进行对比，从而判定细菌的敏感状态。理论上讲，通过设定适当的药物浓度，所有抗结核药物均可以应用固体培养基进行药敏试验，然而吡嗪酰胺除外。吡嗪酰胺仅在pH为5.5左右的酸性条件下才能转化为具有杀菌作用的吡嗪酸，而结核分枝杆菌在酸性条件下难于生长，因此建立可靠的表型吡嗪酰胺敏感试验一直是个难题。虽然曾经有过应用酸性罗氏培养基法进行吡嗪酰胺敏感试验的尝试，但由于罗氏培养基中所含蛋白质对药物有吸附作用，且在酸性条件下结核分枝杆菌生长缓慢甚至不生长，所以此方法结果不够稳定、可靠性差，因此被弃用。以固体培养基为基础的药敏试验常用的有绝对浓度法和比例法，这两种方法在国际上均被广泛采用，对两者的选择往往和习惯有关，孰优孰劣并无定论。

（1） 绝对浓度法（absolutely concentration method）：绝对浓度法由Meissner（1963）提出，采用一或数个临界药物浓度作为敏感或耐药的临界浓度。试验要求接种的细菌处于生长旺盛的状态，一般需要将培养2 ～3周的次代培养物研磨均匀，制备成菌悬液后每管接种103 CFU，35 ～37℃培养2周，在无药对照管满斜面生长的情况下，在含药斜面上生长超过20个菌落时，即可认定被检菌的临床耐药性。在绝对浓度法中临界耐药菌比例是以103 CFU菌群中出现20个耐药菌落的比例来确定的，大体也是一个1%比例法的简化。(https://www.daowen.com)

（2） 比例法（proportion method）：比例法由Canetti（1963）提出，采用临界药物浓度和临界耐药菌比例两个方面来限定有临床意义的耐药性。比例法需要接种两个菌量相差100倍的菌悬液来确定耐药菌在整个菌群中的实际比例。比例法的临界耐药菌比例几经变化，目前大体确定在1%水平上，即如果在所限定的临界药物浓度培养基上能够生长菌落数超过了整个菌群的1%比例时，可能意味着在未来数月内由于药物选择效应，此1%比例的耐药菌将成为宿主体内优势菌群。比例法同间接法药敏试验，要求次代培养物标化的接种量，要同时接种相差100倍的接种菌量于含药和无药斜面上，培养后读取含药和无药斜面上菌落数，计算被检菌群的耐药菌比例。

目前绝对浓度法和比例法在我国处于并行应用的状态，但我国进行的耐药菌流行病学监测中出于资料的国际可比性，往往采用比例法。一些临床株的比较研究显示，绝对浓度法和比例法的结果存在较小比例的差异，但对存在差异菌株的MIC浓度检测显示，这些菌株的MIC值一般接近液体药敏试验的阈值。一般来讲，比例法对耐药的诊断较绝对浓度法更为宽泛，针对同一批病例可能比例法诊断耐药的人数更多，至于差异结果哪一个更可靠，需要对相应病例进行疗效评价和预后追踪，才有可能获得令人信服的结论。