一、方法及原理

一、方法及原理

VITEK MS (VITEK Mass Spectrometry)采用MALDI—TOF MS技术,对临床分离的细菌、厌氧菌、苛养菌、酵母样真菌、丝状真菌、分枝杆菌等,进行快速鉴定。MALDI—TOF MS技术是近年发展起来的一种新型软电离质谱技术,基本原理是用激光照射微生物标本与基质形成的共结晶体,基质吸收激光能量并传递给微生物所含生物分子(主要是蛋白质),同时将H+(质子)转移到生物分子而发生电离。带电荷离子在电场作用下离开微生物—基质表面进入一定长的真空管(TOF)。在真空管飞行过程没有外力作用,电离后的生物分子到达真空管顶端的离子检测器时间与其质量有关,也就是质量越大、飞行速度越慢,到达检测器的时间越长,从而鉴别不同质量蛋白并获得微生物蛋白质量指纹图。(https://www.daowen.com)

分枝杆菌的鉴定相比一般细菌更加困难,主要原因在于分枝杆菌生长相对缓慢且对营养要求高,传统的生化反应鉴定操作烦琐而费时,MALDI—TOF MS技术的出现为分枝杆菌的快速、准确鉴定提供了可能性,然而由于分枝杆菌细胞壁成分坚韧,富含胞壁酸,难以通过常规的前处理方法破坏细胞壁从而获得胞内蛋白成分,影响MALDI—TOF MS的分析,因此需要适当的破壁处理后才能进行质谱鉴定;同时由于固体培养时间较长,分枝杆菌在液体培养基中能够更快地生长,针对液体培养获得阳性的样本,同样也可以通过适当的前处理后进行质谱的快速鉴定。