一、概述

从临床标本中培养分离出结核分枝杆菌是结核病诊断的金标准，标本的质量及前处理流程直接影响培养结果。分枝杆菌分离培养时，取自非无菌部位的标本如痰、尿或其他“非无菌”标本，会受到生长快速的杂菌污染，从而抑制慢生长的分枝杆菌。分枝杆菌细胞壁的高脂含量，使它们与其他细菌相比，具有耐强酸和强碱的特性。这一特性被用于有菌标本消化去污染处理，以消除其他微生物生长而分离培养分枝杆菌。

实验室使用的消化剂有NaOH、草酸、硫酸、苯扎氯铵三钠磷酸盐等，碱性消化方法是现今最常用的方法之一。强酸或强碱消化剂对结核分枝杆菌同样有杀伤力。用盐酸、硫酸、草酸等酸性试剂处理方法，虽然其污染率很低，但结核分枝杆菌的分离率也比用碱性方法低得多。酸性方法可杀死痰标本中的90%的结核分枝杆菌，污染率约为0.5%。碱性方法杀死痰标本中约75%的结核分枝杆菌，污染率约为3%。N—乙酰半胱氨酸是一种黏液溶解试剂，同NaOH一起应用于分离分枝杆菌的标本。1963年和1964年，库比卡和他的同事比较了用4%NaOH和2% NaOH加N—乙酰半胱氨酸处理痰标本的方法，证明2% NaOH加N—乙酰半胱氨酸的方法可提高阳性培养率约30%。1966年络里安、1967年络里安和拉卡斯比较了用2%NaOH加N—乙酰半胱氨酸和2% NaOH处理痰标本的方法，发现2% NaOH加N—乙酰半胱氨酸的方法仅提高阳性培养率0.5%～2%。三钠磷酸盐方法对结核分枝杆菌的损害比NaOH法小得多，但污染率较高。(https://www.daowen.com)

消化去污染的时间和浓度应该严格控制。若消化不足，则会因污染菌太多，使生长缓慢的分枝杆菌无法长出；消化剂浓度很高，消化时间长，可杀死临床标本中20%～90%的分枝杆菌。以NaOH消化剂为例，其在标本中的最终浓度以1%～2%为宜，不可超过2%，消化时间15 ～20 min。任何消化去污染处理方法的污染率，固体培养应不高于5%或低于3%，液体培养污染率以6%～8%为宜。污染率高时，实验室提高去污染试剂浓度之前，应首先考虑以下几个因素：① 患者是否得到充分的告知如何采集合格样本及采集最佳时间，严禁将不同时间段采集的标本混合后送检；② 标本不能及时送检或运送路途较远时，标本是否进行冷藏保存；③ 标本前处理过程中是否因无菌操作不当而受到污染。另外，实验室监测戈登分枝杆菌的分离率也有助于了解结核分枝杆菌培养的质量。戈登分枝杆菌主要存在于水和土壤中，此菌可定植于患者，通常极少认为该菌为致病菌。因此，当戈登分枝杆菌分离率增加，可能说明实验室操作环节受到污染，需要仔细查找原因。一个好的前处理方法是结核分枝杆菌分离率与污染率之间的良好平衡。

来源于无菌部位的样本，如胸腹水、血液及骨髓等标本，无须执行去污染步骤，可以直接进行接种，有时受样本量的影响需要进行离心后接种在罗氏培养基或7H11平板或其他固体培养基。为提高分枝杆菌分离率，标本应经过离心浓缩的步骤，离心速度对结核分枝杆菌的分离率影响很大，一般建议离心速度至少要3 000 g以上，最好能达3 800 g。同时因高速离心会产生高热，对分枝杆菌活性有害，建议使用低温离心机。组织标本培养前需要加入生理盐水或0.2%小牛血清进行研磨后接种。在离心沉淀物中加入0.2%白蛋白液可缓冲沉淀物的毒性。