附录一　菌株保存

附录一　菌株保存

1.试剂

（1） 20%丙三醇—生理盐水。

（2） 冻存溶液（6 g胰蛋白胨溶于100 ml 20%丙三醇水溶液）。

2.实验前的准备

（1） 提前开启生物安全柜，确认生物安全柜的负压和定向气流运行正常。

（2） 准备废弃物容器及消毒液。

（3） 每一个冻存菌株必须编制独立的冻存号码。(https://www.daowen.com)

3.填写菌株保存登记本　包括日期、标本号、患者姓名、住院号、床号、标本种类。

4.短期保存（悬浮液低温保存法）　将结核分枝杆菌充分悬浮于经高压灭菌的20%丙三醇—生理盐水中，保藏在—20℃环境中。使用该方法，大部分分枝杆菌能保存一年以上。

5.长期保存方法（悬浮液超低温保存法）　将10 mg结核分枝杆菌充分悬浮于冻存溶液（6 g胰蛋白胨溶于100 ml 20%丙三醇水溶液）中，保藏温度为—70℃。使用该方法，大部分分枝杆菌能保存5年以上。

（1） 固体培养阳性菌保存：加1.5 ml保菌液于阳性培养管中，将无菌棉签伸入培养管底部，使其湿润，稍用力多次刷取菌落表面，再把棉签浸入培养管底部的保存液中混匀，将棉签沿着管壁挤压出多余的水分弃去，用一次性无菌吸管吸取菌液于保存管中。

（2） 液体培养阳性菌株保存：用无菌吸管吸1 ml保菌液于保存管中，再吸取0.5 ml阳性菌液于保存管中，混匀即可。

6.注意事项　使用密封性能好的螺旋口菌种管和封口膜密封管口，防止水分蒸发。

（钱雪琴）